HPLC法测定清开灵糖浆中黄芩苷的含量.docVIP

HPLC法测定清开灵糖浆中黄芩苷的含量 邱成飞1 侯甲福2 李延春3 （ 1黑龙江仁合堂药业有限责任公司，黑龙江 牡丹江 157011； 2牡丹江医学院，黑龙江 牡丹江 157011； 3 黑龙江仁合堂药业有限责任公司，黑龙江 牡丹江 157011） 摘要 目的：建立高效液相色谱法测定清开灵糖浆中黄芩苷含量的方法。方法：采用BOS Hypersil C18 ODS（150mm×4.6mm,5μm）色谱柱，甲醇-水-冰醋酸（50﹕50﹕1）为流动相；流速为1.0 ml/min，检测波长为277nm。按外标法进行检测[1]。结果：黄芩苷在浓度为0.189μg/ml～0.945μg/ml范围内线性关系良好，r=0.9995(n=5),样品加样平均回收率为99.51%，RSD 为0.34%。结论：该方法简便，准确、重复性好、专属性强，可作为清开灵糖浆的含量测定有效方法。 关键词:清开灵糖浆；高效液相色谱法；黄芩苷；含量测定 清开灵糖浆清热解毒，镇静安神。由上市多年的清开灵颗粒改变剂型而来，由于产品剂型发生了改变，使用了与原剂型不同的辅料，为更好的控制产品质量，我们参照清开灵颗粒的含量测定方法对自产样品进行了方法学的研究，结果表明此方法可行，专属性较好。经方法学研究，现报道如下。 一、仪器与试药 Agilent 1200高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；G1314A -VWD可变波长检测器；Agilent化学工作站；Hypersil C18 ODS2色谱柱（150mm×4.6mm 5μm，大连依利特公司）；UV-1201型紫外可见分光光度计（北京瑞利分析仪器公司）；BP-211D电子天平（德国赛多利斯公司）；SB3200T超声波清洗器（上海必能信有限公司）。 甲醇为色谱纯；水为超纯水；其余试剂均为分析纯。黄芩苷对照品：（批号110715-200212，由中国药品生物制品检定所提供，含量测定用）；清开灵糖浆样品（自制）。 二、色谱条件 色谱柱：大连依利特公司Hypersil C18 ODS2色谱柱（150mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-水-冰醋酸（50﹕50﹕1）；检测波长：277nm；流速：1.0ml/min，柱温为室温；进样量10μl。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于1500。 三、方法与结果 测定溶液的制备 1．1样品溶液的制备 精密量取本品5ml，置100ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，收集续滤液，即得。 1．2阴性对照溶液的制备 按质量标准中处方比例制成不含黄芩苷的阴性对照，依样品溶液制备方法配制阴性样品溶液。 1．3对照品溶液的制备 取黄芩苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含黄芩苷0.1mg的溶液。 2．检测波长的选择及空白试验 取上述对照品溶液，用紫外可见分光光度计在波长200~400nm的范围内进行扫描，结果黄芩苷对照品溶液的最大吸收波长为277nm。因此确定本含量测定的波长为277nm。 取对照品溶液、阴性对照溶液和供试品溶液，在上述色谱条件下测定HLPC图谱。黄芩苷的分离度较好，阴性样品在主成份色谱峰出峰时间区域内没有干扰峰出现，表明对该含量测定无干扰，根据实验结果证明该色谱条件专属性强，分离度好，溶剂、辅料对测定无干扰。 3．线性关系考察 精密吸取上述浓度为0.1012mg/ml对照品溶液各2ml、4ml、6ml、8ml、10ml，分别置10ml容量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，分别精密吸取10μl注入高效液相色谱仪，记录峰面积，计算回归方程。 以浓度y为纵坐标，峰面积x为横坐标绘制标准曲线，计算，得回归方程。回归方程y=3025.825x－131.235,r=0.9993(n=5)结果表明：黄芩苷在浓度为0.189μg/ml～0.945μg/ml范围内，进样浓度与峰面积呈良好的线性关系。 4．精密度试验 精密量取样品5ml，按供试品溶液制备方法制备样品溶液，注入液相色谱仪，连续进样5次，每次进样10μl，记录峰面积，RSD为0.19%，说明仪器精密度好。 5．重复性试验 同一批样品取5份，每份精密量取5ml，按供试品溶液制备方法制备样品溶液，各吸取10μl进行测定，记录峰面积，RSD为0.58%，说明本方法重复性良好。 6．稳定性实验 取同一批号样品溶液，在室温放置，分别于0、2、4、6、8小时进样测定，RSD为0.4%，说明本法稳定性良好，能满足测定要求。 7．回收率试验 采用加样回收率试验，取同一批已知含量的样品5份，每份精密量取2.5 ml，分别置于100 ml容量瓶中，分别精密加入一定量黄芩苷对照品，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤，按含量测定方法进行测定，采用加样回收率试验，5次平均回收率