腺病毒自身的致炎作用在以其为载体的基因治疗对急性肺损伤治疗效果的影响及意义.pdfVIP

腺病毒自身的致炎作用在以其为载体的基因治疗 对急性肺损伤治疗效果的影响及意义 、一j 上海交通大学附属儿童医院呼吸科(200040)置燕陆权 InstituteofEnvironmental of Medicine，theCenter of LungBiology，UniversityPennsylvania FeisteinS Sheldon andCdficalCare of MichealFBeers Depart．ofPulmonary Medicme，UniversityPennsylvania [摘要】目的评价腺病毒自身的致炎作用在以其为载体的基因治疗中，对小鼠急性肺损伤(ALl)治疗效果的影响及 意义。方法100％02啜入诱导小鬣高氧往ALI动物楼型；在100％02吸入前48h经彝腔遥道给予装载LaeZDNA的躲病毒 质糙感染小鼠，并观察小鼠的死亡率。争半乳糖酶活性测定法用于确定转染的LacZ基因在肺脏的蛋白活性的表达水乎；肺 的千，湿重比、支气管．肺泡盥洗液内的髓白浓度和细胞分类分析用予评价肺炎症反应的程度。结粜经鼻腔通路的以腺病毒 h惹 药载俸静麓因澹移，可选成转染基因LacZ瞻畿叁表达活性旋转驻持续有效鹣裹表达，嚣蔻，荚表达汞警在02暖入72 vs 仍可维持为02吸入前的2倍以上(3．6881．589 U／rag U／mg)-；该组小鼠对高氧吸入表现了轻度增加的敏感性和有统计学差 异的5瞩小鬣的生存时阏的较短【(86士3)h vs(94童7)h】；闻嚣孛，该缱小鬣的支气管，肺沲肉炎症细臆的渗港，在100％02 吸入48 h艨均明鼹商于对照组，继续02吸入24h后明显下降约50％；肺于，湿重比和支气管．肺泡灌洗液内蛋巍浓度茏明显 下降。结论腺病毒作为基因治疗的载体具有很强的转染和持续高效表达靶基因的能力；其病毒相关性的肺部炎症反威是轻 度秘彗时鹃，著W在达裂高峰蜃迟速缓解。 毽她，凌唐用熬病毒兔载{謇豹莲医治疗于瑟灏疾痰黪研究耱实践瓣，应考虑获 病毒相关憔炎症殿应的存在，并需在评估基因治疗疗效时加以重视。 基因治疗是指将有治疗作用的基因通过一定的载体导入人体靶细胞而从基因根本上治疗疾病的一种 现代治疗策略。腺病毒是基因治疗的主要载体，并占所有基因治疗研究中的28％。急性肺损伤(ALI)是 严熏威胁生命安全的常见急危重疫，其病死率在我豳高达60％-70％。传统煦ALI治疗方案对挽救生命和 疾病转归影响有限，因此，尝试新的治疗手段如基因治疗或基因治疗为载体的干细胞治疗√Ⅲ已是目前研 究静燕患。然蔼，关予艨病毒自身的致炎作雳在戮萁为载体翁基因治疗对ALl治疗效采影响酶报道惫少冤。 本研究在建立小鼠AU疾病模型的基础上，观察了腺病毒自身的致炎作用对小鼠ALI基因治疗效果的影响 及意义。 材料与方法 一、动辏及材料 1．动物：本所研究使用的小鼠均获得美因宾夕法尼亚大学动物部批准。C57／B6雄性小鼠，年龄(12 缓冲液(PBS)治疗组(PBS组)36只：③无治疗对照组(无治疗组)：33熙。 2。艨病毒载体妻g 了腺病毒部分毒素DNA片段的5型重组腺病毒。LaeZ DNA片段加载在腺病毒DNA结构系统的Xbal和 Kpnl内切位点之闻，LacZDNA片段加载步骤在宾夕法尼亚大学内科医学基因应用部完成并免费提供使耀。 腺瘸毒质粒的应用浓度为4×109空斑形成单位(PFU)Iml。 一102l一 二、方法 1。经鼻腔逶道的治疗方法：在100％02暴露前2d，根据小鼠