四逆汤抗心肌缺血再灌注线粒体氧化损伤与其线粒体介导凋亡机制的研究.pdfVIP

令围中两医结合娃础璀论学术研讨会论文集 四逆汤抗心肌缺血再灌注线粒体氧化损伤及其线粒体介导凋亡机制的研究 赵丹洋，吴伟康，赵明奇 0080) (中山大学中西医结合研究所，广东广州51 摘要目的：阐明四逆汤抗心肌缺血再灌注的线粒体氧化损伤作用及线粒体介导的凋亡途径。 方法：实验分为对照组、缺血再灌注模型组、四逆汤治疗组。采用腹腔注射Pit(垂体后叶素)制 造小鼠心肌缺血再灌注模型。生化法测定心肌线粒体SOD活性、线粒体MDA含量及线粒体肿胀程度， 免疫组织化学法测定心肌组织Caspase一9、Caspa Ca se一3、 Ca 后，可明显下调Caspa 再灌注小鼠MnSOD基因的表达。结论：四逆汤可以明显减少心肌缺血／再灌注过程中的线粒体氧化损 蛋白的表达，下调Caspase-9的蛋白表达，继而下调Caspase家族最终执行者的Caspase一3蛋白表 达而实现。 关键词：四逆汤有效部位；心肌缺血再灌注损伤；氧化应激；线粒体；凋亡 心肌缺血再灌注损伤发生于冠状动脉血管阻塞后血液复流时，在临床上心肌缺血再灌注损伤过 程的发生通常在血栓溶栓术、血管成形术、冠状动脉搭桥术及心脏移植术后…，缺血再灌注损伤包 含心脏收缩功能障碍、心率失常、微血管损伤、不可逆的心肌细胞损伤及细胞死亡等一系列的病理 事件。这些变化被认为是心肌中氧化产物形成过多和内源性抗氧化物质活性降低之间失衡造成的。 四逆汤是汉代张仲景在《伤寒杂病论》中主治少阴虚寒的经典名方，由附子、干姜、甘草组成。具 有温中去寒、回阳救逆之功效。四逆汤具有良好的抗心肌缺血再灌注损伤，全面保护心脏的作用。 但目前对四逆汤抗心肌缺血再灌注损伤作用的线粒体一凋亡途径尚不清楚。本文将从以下几个方面 阐明四逆汤抗心肌缺血再灌注损伤作用的线粒体机制。 1材料 1．1动物雄性昆明种小鼠(22±19)，中山大学中山医学院实验动物中心提供 1．2主要试剂、仪器：2 8％硫代 建成生物工程研究所。SABC免疫组化染色试剂金购于武汉博士德生物工程有限公司；RNA提取试剂 PERKIN 7一GCTTCTTTGCAGCTCCTT一37，P2：5一 设计，由上海生物工程研究所合成。B—actin引物序列P1：5 AAGGTCTCACACATGATCTG一37， 41 扩增片段长度： 0bp；MnSOD引物序列Pl： 7 9 Se一9 57-GGAGAGCAGCGGTCGTGTAA一3 Spa bp；Ca 5 05 08) 26bp。垂体后叶素(Fit)为上海第一生化药业公司上海生物化学制药厂生产(批号02 i．3实验药材 附子、干姜、甘草购自广州市药材公司． 令闺中两医结合捧础理论学术研讨会论义集 2检测指标及方法 2．1 r01 schemic 实验分组：昆明种小鼠，随机分为三组：对照组(Contgroup，”8)、缺血模型组(I group n=8)，四逆汤治疗组。对照组及缺血再灌注模型组以蒸馏水灌胃，治疗组以四逆汤灌胃，连 续三天，末次灌胃30分钟后治疗组及模型组腹腔注射Pit(Pit