微生物肠杆菌科综合实验报告.docVIP

肠 道 杆 菌 实 验 论 文 班级：检验一班 实验日期：2013-09-24~30 实验组：第二组 指导老师： 综合实验报告 专业班级： 医学检验 时间：2013年 9月 24日～9月30日 实验名称 肠道杆菌 指导教师 熊亚南 一、预习报告 1. 实验目的 1.1掌握肠道条件致病菌与肠道致病菌的菌落特点。 1.2掌握肠道杆菌的主要生化反应。 1.3掌握肠道杆菌的分离鉴定方法。 1.4掌握粪便标本细菌学检测流程 2. 实验基本原理 肠道杆菌的细菌为革兰氏阴性菌，大多数有鞭毛，能运动。少数无鞭毛不能运动，不产生芽孢，需氧或兼性厌氧，在普通培养基上，一般都生长良好，均能发酵葡萄糖产酸或产气，触酶试验阳性，氧化酶试验阴性，还原硝酸盐。 这类细菌是人类和动物肠道中的细菌，有的引起腹泻、肠炎、肠热症和痢疾等。有的为条件致病菌，有时也可引起身体各个部位的感染。 3. 实验流程图 主要仪器设备 高压灭菌锅 试管 锥形瓶 接种环 酒精灯 无菌玻片 显微镜、载玻片 镊子 二、实验报告 1.材料与方法 1.1材料 2号菌液 双糖铁培养基 CB培养基 SS培养基 基础培养基 青霉素 庆大霉素 氯霉素 复方新诺明 志贺氏诊断血清 沙门氏诊断血清 无菌生理盐水、结晶紫染液、卢戈碘液、95%乙醇溶液、稀释石碳酸复红染液、无水乙醇、松柏油 1.2方法 1.2.1标本分离 将菌种用平板划线法，分别接种于CB和SB培养基中，37℃温室培养24小时，进行菌落分离。 操做人： 1.2.2 鉴别实验 双糖铁实验 用接种针以无菌操作技术挑取可疑菌落，立即垂直插入培养基中心至接近管底处，再循原路退出到斜面上；接种针自斜面最低处向上划一直线（要求通过试管培养基的中心点），然后再从斜面低处向上轻轻来回作蜿蜒划线；接种完毕，盖好试管塞。贴上标签纸。37℃培养18~24小时，取出观察结果并分析 ，观察结果。 Gram stain实验 .1 涂片 于洁净无油的载玻片上,加无菌生理盐水一滴,按无菌操作法用接种环取待检标本少许，研入无菌盐水中，使成一个均匀、极薄菌膜，直径在1cm 左右。 .2干燥 使涂片自然干燥 .3固定 将玻片涂有菌膜的面向上迅速地往返通过火焰２－３次，以玻片触及皮肤，热而不烫为度。 .4初染 在制作的涂片上滴加结晶紫染液，1min后水洗，并将片上积水轻轻洒净 .5媒染 加卢戈碘液，1min后水洗，并将片上积水洒净 .6脱色 加95%乙醇溶液数滴于涂片上，频频摇3-5s后，斜持玻片，使乙醇溶液流去，再加乙醇溶液。如此反复２－３次，直至流下的乙醇溶液无色或稍呈淡紫色时为止（约30s）。水洗，轻轻洒去片上积水。 .7复染 以稀释石碳酸复红染液1min后，水洗，待干或用吸水纸印干，油镜检视。 血清学实验 取一块无菌玻片，平均分成两区，分别滴志贺和沙门氏诊断血清用接种环取在双糖铁培养基上培养的可疑菌种分别与玻片上的两种血清混匀，注意每换一种血清时应用火焰灭菌再取菌落，以防交叉感染。混匀后等待实验结果并观察 2．2.2血清学实验结果 通过实验，观察到在滴有沙门氏诊断血清中发生凝集反应，且志贺氏诊断血清没有变化。如图2-2所示： 图1-2血清学试验结果 2.2.3革兰氏染色结果 在显微镜下观察到可疑菌被染成红色，则该菌为革兰氏阴性菌。 2.3 药敏实验 药敏试验抗生素抑菌圈的大小 抗生素 抑菌圈大小（单位：mm） 青霉素 9 氯霉素 22 庆大霉素 25 复方新诺明 18 图1-3药敏试验结果图 3.结论 3.1通过鉴定试验，确定该2号菌为沙门氏菌 3.2通过药敏试验分析，该菌种对庆大霉素最为敏感 4.自评反馈 经过本次试验，我们通过团队密切合作，组员各自分工明确，在大家的共同努力下，实验成功的结束了。 在本次实验中我们有做的好的地方：因为本次接种的是致病性的菌种，所以全部接种过程都在酒精灯附近进行试验操作，做好灭菌，操作非常谨慎。在倒平板时，快速，稳健的倾倒。实验结果观察非常细心，真实的记录实验现象，实验结果，应用科学严谨的态度，在测量时反复测量求平均值，避免人为的误差。 也有差强人意的地方：在用平板划线法接种过程中，由于操作手法不熟练，琼脂板被破坏。 在以后的实验中，本组队员将再接再厉，认真的对待每一个实验，细心，耐心的得出实验结果。 参考文献 /p-40095474739.html /phtml 河北联合大学 临床微生物学和微生物学检验学 Clinical Microbiology Microbiological Diagn