重组质粒pVAXl-C3d-S-%2c2-S的构建与其免疫治疗作用的研究.pdfVIP

后死亡病程极短，且其存活率小于10—15％。目前采取的综合支持疗法和促肝细胞生长方法均未能获 得突破性进展，为此国内外学者一直致力于非内科药物治疗，其中人工肝支持系统(Artificial Li，。。Sup． port 培养以及生物反应器等技术的日趋成熟，新一代以培养肝细胞为基础的生物人工肝成为研究热点。但研 究者很快发现它虽能较好地替代肝脏的解毒与生物合成功能，但肝衰竭患者体内积累的大量代谢产物及 毒性物质难以在有限的交换中由培养肝细胞解毒，反过来还可能对培养肝细胞的存活及生物学功能产生 不利影响；如将早期偏重于解毒作用的人工肝支持方法如血液灌流、血浆置换等与之相结合，组成混合 型人工肝支持系统，可使人工肝的生物合成转化功能及解毒作用更加完善。我国在混合型人工肝方面的 研究尚处于起步阶段，尚未建立较成熟的HALSS技术。我们将血浆置换与TECA—I型生物人工肝相结 合构建混合型人工肝支持系统，治疗15例慢性重型肝炎病人，11例好转出院，获得了较满意的疗效， 说明混合性人工肝支持系统对于慢性重型肝炎是一种有效的辅助支持和治疗手段，值得进一步扩大病例 数进行深入临床应用研究。 获得大量的、功能状态好、能高密度培养的肝细胞是H^【筠治疗成功的重要因素。国外一些研究 曾采用人肝肿瘤细胞、人胚胎肝细胞或猪肝细胞作为HALSS中肝细胞的来源。但肿瘤细胞对受体的可 能危害及胚胎细胞的来源稀少等问题，阻碍了HALSS的发展。本研究选择经过检疫、品系较纯的中国 实验用小型猪为肝细胞供体，采用经我们改进的肝细胞分离和培养方法，获得了大量能满足HALSS需 要的猪肝细胞。在治疗过程中，由于患者血浆代谢产物与有毒物质对猪肝细胞的毒害作用，监测肝细胞 活率、及时更换新鲜猪肝细胞是HALSS治疗成功的关键。 四川大学华西医院感染病分子生物学重点实验室 教育部人类疾病生物治疗重点实验室(成都610041) 成都地奥集团新药部 深圳东湖医院 孙梅芹赵连三陈守春周陶友王松唐红陈毅荣闫娟 前言 国内外迄今为止的研究结果表明，现有的各种核酸疫苗普遍存在着免疫诱生效力偏低的问题，尚不 能达到实用化的目的，这已经成为限制核酸疫苗实用化的“瓶颈”。国内外学者们已采用多种不同的方 法，来增强核酸疫苗的免疫诱生效力，如使用高效表达载体、增加分子佐剂、改变接种方式等。而分子 佐剂的研究近年来发展较快。文献报道，抗原与若干个C3d分子偶联成为融合蛋白，可增强该抗原的免 疫原性。因此，补体分子C3d作为一种新型佐剂已引起人们的关注。为此，我们构建了含有补体C3d及 pres2S：抗原编码基因的乙肝核酸疫苗重组质粒，验证补体C3d的佐剂效应，以期建立一种新型且具有 较高表达效率并能诱生更强免疫应答的乙肝核酸疫苗，从而加快乙肝核酸疫苗的实用化进程。 HBV感染目前尚无理想的治疗措施。由于HBV具有严格的种属特异性，HBV感染的动物模型难以 肝炎及其防治的研究，开辟了一条新的途径。乙肝转基因小鼠(HBV全基因)的血清及肝组织内存在 病毒抗原的表达和HBVDNA的复制，能够作为乙肝病毒携带者模型，用于乙肝核酸疫苗免疫治疗效应 内，发现Ⅷ}s鲰可被完全清除。由此，为了进一步探讨本实验构建的含有新型佐剂分子C3d的重组乙 一138— C3d—s2s接种 肝核酸疫苗pVAXlC3d—s2s在体内的免疫治疗作用，本研究将重组乙肝核酸疫苗pVAXl 于BALB／e HBV转基因小鼠，动态地检测了小鼠外周血清中特异性抗体的产生、HB妇和HBVDNA水 平的消长以及小鼠肝组织中乙肝病毒S抗原表达的变化。 材料与方法 1．1实验材料 (1)仪器及试剂 TarotoeThermal BALB／C小鼠购皂四川大学华西医院实验动物中心；PCR仪为Hangzlaou