日本七鳃鳗(Lampetra+japonica)口腔腺分泌液生物活性地研究.pdfVIP

辽宁-土连 套国海再生曲杖术与喀耳焉静学术套议语文毒 2006．8．2-6 肖蓉1’赵静1t2’李庆伟1)·赫荣乔2)+ 辽宁师范大学生命科学学院，大连116029；2’中国科学院生物物理研究所脑与认知科学研究中心 脑与认知科学国家重点实验室，北京lOOl01) (human 是维持七鳃鳗生存所强需的。 关键词：日本七鳃鳗，口腔腺分泌液，纤维蛋白原溶解酶，组织溶解 1研究背景 日本七鳃鳗(Lompetra 代表动物之一，主要依靠吸食大型鱼类和海龟的血肉而生存[1】。Lennon将七鳃鳗口腔腺分泌液命名 H．和GageG的实验结果表明某些种类七鳃鳗的lamphredin能够抑制血液中纤 为lamphredin[2]。Gage 表皮覆盖物的细胞溶解活性[2，4】。此外，Baxter还认为无论是寄生型还是非寄生型的七鳃鳗，其 的凝固时间，但是对凝血酶和凝血酶原无作用【5】。本文的主要工作集中在lamphredin的纤维蛋白原溶 解酶活性及组织溶解功能的研究。 2方法 2．1Lamphredin的制各 本实验室于2003年12月在中国黑龙江省松花江同江流域捕获处于涸游期的日本七鳃鳗数条，然 后用注射器将口腔腺内液体抽出，于．80。c保存。 2．2Lamphredin的纤维蛋白原溶解酶活性16】 将lamphredin与人纤维蛋白原反应液在37。C温育．于不同时间取样，电泳检测：将胶上的蛋白 条带转移到PVDF膜，测定膜上产物条带的N一末端序列。 2．3EDTA和二价金属离子对lamphredin纤溶活性的影响17l h后取样，电泳检测。将二价金 将EDTA，lamphredin与人纤维蛋白原的反应液在250C中孵育l h后取样，电泳检测。 属离子、EDTA、lamphredin和人纤维蛋白原的反应液在250c孵育l 2．4Lamphredin对BSA和血红蛋白的降解作用 将lamphredin分别与BSA和血红蛋白在37。c中孵育．电泳检测。 2．5Lamphredin对细胞生长的影响 MTT及相差显微镜观察lamphredin对细胞生氏及形状的影响 3结果 3．1Lamphredin的纤维蛋白原溶解酶活性 如图Fig．IA所示，反应5 min rain时，可检测剑lamphredin的纤维蛋白原溶解酶活性；反应30 344 t掌·土t ●鼻牟耳t●技术与●耳焉●学术套诅吾文毒 2006．tL2-6 时-可检测到Au链被lamphredin完全降解；反应12 h时，BB链也能被lamphredin降解。但是，将 反应时间延长到24 (44，700Da)，fib-b(40，000Da)，fib-c(39．400Da)，fib-d(38。300 Da)和nb．f Da)，fib-e(18,600 min (17，500Da)．其中fib-a，fib-b和mH在反应5rain时就出现了，而6b-d，6b-e和fib．f是反应30 这就是说lamphredin水解纤维蛋白原主要发生在纤维蛋白原的中间或C末端。根据人纤维蛋白原的氮 这些结果表明七鳃鳗口腔腙分泌液能识别多个纤维蛋白原的水解部位。 反应5 min(1ane2)，10min(1ane3)，30min(1ane4)，lh(1ane5)，2h(1ane6)，12h(1ane8)和24h(1ane10)。 Fib孵育2