葡萄糖氧化酶基因转化小麦地研究.pdfVIP

2003年全国作物遗传育种学术研讨会论文集 葡萄糖氧化酶基因转化小麦的研究 康乐吴成君叶兴国徐惠君杜丽璞马有志 (中国农业科学院作物育种栽培研究所，北京10008I) Oxidase，GO)在植物抵抗真菌和细菌感染时起重要作用。奉研究的目的足利用幕 摘要葡萄糖氧化酶(Glucose 岗枪介导法将来源十黑曲霉的GO捧斟转入优良小麦品种扬麦10呼、鲁麦22哆和鲁麦23吁，从轰击的3300块幼 个T．代株系已整合进rGO基浏。 关键词小麦；葡萄糖钒化酶雉岗；转化；幕斟枪法。 葡萄糖氧化酶(Glucose 菌的侵入，并通过激活水杨酸合成以诱导防卫基因的表达，使植物产生防疫系统获得性抗性。 因此，GO基因是具有广谱性的抗病基因。目前已在多种细菌和真菌中检测到GO基因，但在 植物和动物中仍术发现该基因。1998年王志兴…通过PCR扩增法克隆出了黑曲霉的GO基因， 基因已整合到受体基因组。淀粉一碘化钾显色反应检测到了转基因植株产生的H：0z，抗病性 鉴定表明转基因水稻对稻瘟病具有良好的抗性。本研究的目的是利用基因枪法将GO基因转 入小麦优良品种，创造小麦抗病新种质。 1材料和方法 1．1小麦材料和组织培养 供试的小麦材料全部为昔通小麦品种，包括扬麦10号，鲁麦22号和鲁麦23号，由本实验窒祉集 培养7d做为基冈枪轰击的靶材料。 1．2质粒载体 启动子和选择标记bar基冈的pAHC20质粒载体由本实验室保存。 造过程如幽所示。 1．3基因枪法共转化 将质粒pUbi．GO和pAHC20按1：1摩尔比充分混合，包裹在直径1．6p,m的金粉微粒上。Hjpds一1000／He 1．4转化体筛选租植株再生 !!!!笙全里笪塑鲨堡堕!!竺查竺堕垒堕塞笙 (I／2MS+Bialaphos 时移入花笳，置1：温室。 一 @_镬j． —1一 、忿‘I ＼≯= 1．5 PCR扩增分析 TAGGAGGAA：T、AGAACC一3’。 2结果与分析 2．1再生植株的获得和To代植株的PCR分析 培养J。；L多次共轰击r Bialaphos 表1 基因枪转化三个小麦品种的结果 斟A愈伤封l织(h；th养堆1的筛选 嘲B n生植株 2003年全国作物遗传育种。乎术研讨会论文集 幽C转GO堆IXJT0代怕株PCR分析 m忡对照；3和15Ⅲ性对照：4～j4铆l性植株。 和17．PCRMa『ker；2和16 2．2T，代转基因植株跟踪分子检测 需德尔分离比例(表3)。 HD转GO艇洲T-代植株PCR分析 PCRMarker。 ～14㈣I雌机株；l5刖忡对照：16．m悱对照：17 3讨论 代的遗传击fl!律进{r r分析，认为外源基畴j的分离比例基本L符合3：∥6”。但徐惠村等d：村膳…怆介学 2003年全国作物遗传育种学术研讨会论文集 法获得转黄花叶病毒复制酶基因小麦的研究中，认为转基闵Tt代的分离不符合盂德尔分离比例”1。本研究 中转基闪小麦的T，代分离不符合孟德尔分离比例。T，代刚性频率普遍偏低。可能是由于二方面的原冈， 一是T，代群体太小．每个株系只有15～40株后代，代表性不够；二是可能网为孟德尔遗传规律是由内源 基冈的遗传规律统计出来的，而外源基因转化进入有机体后的遗传行为会与之有所不同。 卜一步准备对转基因植株进行抗病性鉴定，包括全蚀病、自粉病和赤霉病等，验证GO基闳在小麦遗 传背景中的功能，为转基冈小麦的进一步利用打”F基础。 References ”J I忠必 葡萄糖能化酶璀㈨的克酶度其托人肠杆菌和植物中的表达1998年博l：学位论文 ”l彭共，J，出必