离子色谱方法及其应用.doc

“离子色谱方法及应用”详稿 张筑元 2007年11月 1 方法原理 1.1 离子色谱的创立 离子色谱（以下简称IC）是高效液相色谱的一种，是分析离子的一种液相色谱方法。 液相色谱法（1906年，俄国植物学家Tswett ）：1906年色谱的发明者，俄国植物学家M.S.Tswett，是在研究植物色素的过程中，将植物叶子的萃取物倒入填有碳酸钙的直立玻璃管内，然后加入石油醚使其自由流下，结果色素中各组分互相分离并形成各种不同颜色的谱带(如图)。这种方法因此得名为色谱法。以后此法逐渐应用于无色物质的分离，“色谱”二字虽已失去原来的含义，但仍被人们沿用至今。从此之后，化学家、生物化学家和生理学家们在制备高纯化合物、分离和鉴定复杂混合物时便有了一条崭新的有效途径。自从有了这种手段，使许多过去被认为是单一的物质，判明却是多种化合物的混合物；许多化学反应的过程依靠这种方法而得以探讨；终于使许多复杂混合物，例如维生素、药物、色素、氨基酸等得到离析；这种方法甚至帮助科学家们了解了一些长期模糊不清的自然现象，诸如植物与动物的营养、激素对人和动物的生理特性、维生素在动植物体中的分布等等问题。Tswett 的实验意义很大，尽管他于1907年在德国柏林植物学会议上反复强调色谱技术，但并没有受到当时科学界的重视。经过二十五年后，德籍奥地利化学家R.Kuhn 等利用他的方法在纤维状氧化铝和碳酸钙的吸附柱上将过去一个世纪以来公认为单一的结晶状胡萝卜素分离成a 和b 两个同分异构体，并由所取得的纯胡萝卜素确定出了其分子式。另外他还发现了八种新的类胡萝卜素，并把它们制成纯品，进行了结构分析。同年，他又把注意力集中在维生素的研究上。在确定了维生素A 的结构以后，于1933年从35000升脱脂牛奶中分离出一克核黄素（即维生素B2），制得结晶，并测定了它的结构。此外，他还用色谱法从蛋黄中分离出了叶黄素；还曾把腌鱼腐败细菌中所含的红色类胡萝卜素确定离析出来并制成结晶。Kuhn正是由于在维生素和胡萝卜素的离析与结构分析中取得了重大研究成果而获得了1938年诺贝尔化学奖，也正因为他的出色工作使色谱法名声大振，迅速为各国科学家们所注目，广泛被采用起来。 20世纪40年代至50年代初，先后出现了纸色谱（paper chromatography,PC）和薄膜色谱法(thin-layer chromatography,TLC)。 特点：较经典色谱法简单、分离时间短，样品量要求小。1952年，James和Martin提出了气相色谱法（gas chromatography,GC)特点：以气体作为流动相。应用范围广泛受到人们重视。但对不易气化和热不稳定性差的化合物难以分离。20世纪60年代后期由于新型色谱柱填料高压输液泵和高灵敏度的器的出现，发展出了高效液相色谱（High performance liquid chromatograghy,HPLC）。高效液相色谱法的广泛应用始于70年代，经过三十几年的发展，在基础理论、仪器装置和色谱柱等方面的研究已趋于成熟。其应用范围十分广泛，几乎能够分析所有的有机、高分子、生物样品。据估计，目前已知的化合物中，有80%的化合物需要用高效液相色谱进行分离分析。 吸附色谱 吸附能，氢键 异构体分离、族分离，制备 分配色谱 疏水作用 各种有机物分析与制备 凝胶色谱 溶质分子大小 高分子分子量及其分布测定 离子色谱 离子性物质的分析 手性色谱 立体效应 手性异构体分离，药物纯化 亲和色谱 生化特异亲和力 蛋白、酶、抗体 盐析色谱 溶剂化作用 蛋白质、非电解质分析 1.5 离子色谱分类 分离模式 分离机理 分析对象或应用领域 离子交换 库仑力 无机和有机离子分析 离子排斥 Donnan平衡 有机酸、氨基酸、醇、醛 离子对 疏水作用 离子性物质分析 离子抑制 疏水作用 有机弱酸弱碱分析 离子分配 疏水作用 生物大分子 金属配合物 疏水、螯合 金属离子 1.6 不同分离模式所利用的溶质性质 分离模式 所利用的物质的性质差异 离子交换 电荷与离子体积 离子排斥 解离常数与疏水性 离子对 (RP) 与离子对试剂之间的亲和力，离子对化合物的疏水性 离子抑制(RP) 在一定pH值下的疏水性 反相分配(RP) 有机离子本身的疏水性 1.7 离子色谱分析的对象物质 离子类别 主要离子种类 无机阴离子 卤素及简