脑啡肽的胶束电动毛细管色谱-激光诱导荧光检测的研究.pdfVIP

广西师范大学学报(自然科学版) 2003年10月 OF V01．21No．3 JOURNALGUANGXINORMALUNIVERSITY 脑啡肽的胶束电动毛细管色谱一激光 诱导荧光检测研究 黄颖“2，段建平3，陈巧仁2，陈颖3，陈国南“ (1福州大学化学系，福建福州350002；2榀建师范大学化学与材料学院，福建福州350007 3福州大学中心实验室，福建福州350002) 脑啡肽的发现始于1975年，其在脑和脊髓液中的分布主要集中于与感觉传导，内分泌调控，运动协 调，呼吸，血压及行为等有关脑区的神经元，是一类重要的神经递质．由于其在生物体中的含量极微，通常 为nmol／I．数量级，因此，寻求灵敏，高效，快速，准确的分析方法无论对于了解其作用机制及临床医学研 究都有重要意义．激光诱导荧光具有高灵敏度的特点，但很多物质本身不发荧光，故需采用衍生技术． FITC是衍生氨基酸的常用试剂，亦可用于肽及蛋白质的衍生，其最大激发波长(490 激光器(488 为详细地考察了衍生反应条件及毛细管电泳分离条件，迄今未有这方面的研究报道． 1实验部分 nm， Em：535 Ala rLm)，八种脑啡肽标准品：①TyrGlyGly—PheMet(ME)；②Tyr Ala GlyGly—PheI。eu(I．E)；④Tyr—DGly—PheMet(D～AM)；⑤GlyGly—PheMet(D)；⑥TyrGly Gly． Phe PheD I，eu—I，ys(LI．)；⑦Tyr—D—Ala～GlyI．eLI(D—AL)；⑧Tyr—Gly 烷基硫酸钠(SDS)(Sigma，99％)，荧光素异硫氰酸盐(FITC，isomer 1．2实验方法称取定量脑啡肽标样，溶于0．1％(V／V)的三氟醋酸中，配成10_1mol／[，的肽储备液， 丙酮溶液，于室温下暗处反应12h以上，衍生物经稀释后进样分折． 2结果与讨论 2．1荧光缓冲液pH的影响 增大，衍生效率略趋下降． 2．2衍生缓冲液浓度的影响改变硼酸硼砂缓冲液的浓度，考察衍生介质浓度对衍生效率影响实验结 果表明，在5～40mmol／I，的硼酸硼砂溶液中，衍生效率不受浓度大小的影响、 2 3摩尔比的影响 衍生效率反而下降．但摩尔比为70：1时背景信号亦增多增强，综合考虑衍生效率及分离度，选择摩尔比 为40：1． 基金项目：福建省自然科学基金资助项目(DOll0005，C0110007)；教育部重点科研基金资助项臼 第21卷 广西师范大学学报(自然科学版) 247 2．4衍生反应随时间变化在上述优化的衍生条件下，以TGG为例，考察衍生反应随时间变化及衍生 物的稳定性．结果表明，衍生反应10h后达到平衡，衍生物在34h内具有良好稳定性． 2．5毛细管电泳分离模式尝试不同pH，不同缓冲体系以及添加不同试剂(有机溶剂，金属离子，胺类) mmol／I。时，各组分达到基线分离，见图1 225 MInukS 图1 8组分胶束电动毛细管色谱图 mmol／L 60)，分离电压20kV， 分离条件㈣100 oI／L硼砂+60 SDS(pH--10