两种比色法测定甲壳素类化合物含量的研究与比较.pdfVIP

中国食品学报 2003年增刊 JournalofChineseInstituteofFoodScienceand Technology 两种比色法测定甲壳素类化合物含量的研究和比较 傅海舰 薛长湖 杜世振 李兆杰 (中国海洋大学水产学院青岛266003) 摘要建立了间苯二酚显色测定甲壳素类化合物含量的分光光度法。方法的测定波长为500rim，线性曲线 方法实验周期短，灵敏度高。 关键词 甲壳素 间苯二酚比色法 甲壳素(chitin，缩写为CT)、壳聚糖(chitosan，采用水杨醛与壳聚糖反应，同样测得的结果只为 缩写为cs)是由N一乙酰一2一氨基一2_脱氧一样品中氨基的数量，不能直接反映样品CT、CS D一葡萄糖(GIcNAc)和2一氨基一2一脱氧一D一的总量[5|。 葡萄糖(GlcN)通过p一(1—4)糖苷键连接而成的多糖经浓无机酸脱水后产生糠醛(戊糖)或 直链多糖H]，通常N一乙酰度在60％以上的，被称糠醛衍生物，生成物能与酚类化合物缩合生成有 之为甲壳素，而N一乙酰度在55％以下的称为壳 聚糖。甲壳素在医疗保健、环卫、饮食、化妆品和 解为单糖GlcN后，被浓硫酸脱水后形成的糠醛 13用化工等方面，使用日益广泛【2』2。 及其衍生物再与间苯二酚缩合显色，进行测定。 随着对甲壳素类化合物研究的深入，需要一 种简便、快捷的方法来直接分析样品中甲壳素的 1实验和方法 含量。从分子结构上看，甲壳素和壳聚糖的分子 1．1材料 主链都是由氨基葡萄糖连接而成，不同的是在不 低脱乙酰度甲壳素是本实验室用雪蟹甲壳素 同位置的氨基发生了乙酰化反应。常规的测定方 法也从这里着手，利用氨基基团的特性来测定样 低脱乙酰度甲壳素都为非酸性水溶甲壳素，在 品中CT、CS的含量。最为常用的是Elson—Mor- gan法，也称为DMAB法[31。该法将样品先水解 为市售纯品，脱乙酰度分别为77％和96％，能 再与DMAB试剂显色，但是要求样品必须溶解于够溶解于1％的醋酸溶液或0．1 4mol／L的盐酸中。实验中发现，高分子的壳聚液中。样品的脱乙酰度见表1。氨基葡萄糖盐酸 糖虽然在稀酸中溶解，但并不溶于4mol／L的盐 酸中，而且部分分子量在IOKDa附近的低聚糖 60℃干燥，存放于硅胶干燥器中。 也不溶，这就限制了其应用，而且该方法的得率 表1 Cr、Cs样品的脱乙酰度 偏低。PDABA方法与此方法类似【3，4J。S．Proc． Table1The of theCT degree hazkova直接利用壳聚糖分子中的氨基基团与茚 andCS samplesapplied 三酮反应，570nm下比色可较好的测得脱乙酰度 样品编号 脱乙酰度(％) 接近100％的壳聚糖的含量，而对于脱乙酰度稍 CTO．50 53．4 低或者是甲壳素，则产率过低甚至不能测定…1。 CT0．40 2．9 CI．0．35 38．0 Cr0．30