分子印迹模拟抗体酶的合成和催化水解动力学的研究.pdfVIP

分子印迹模拟抗体酶的合成与 催化水解动力学的研究 余建华 黄启斌 马德君 贾玉凤 邓云度 防〔化研究院) 摘要 本文首次系统报道分子印进模拟杭体醉的合成以及不同结构的分子印进棋拟杭体阵在催化 欺酸幼水解过程中结构与催化性能的关系.研究结果发现:合成的模拟阵不仅其有催化性，而且具 有选择性.模拟醉的功能基、金属离于、纳“米随道”对模拟醉的催化性能均有影响.含有 卜笨基- 苯甲跳胺功能基、Co乍具有 纳“米通道’的断型模拟杭体醉对数酸醉催化水解性能明显离于其它同 类模拟阵，其催化水解能力最高的模拟醉MIP-3其催化魏政命水解的速率可达未催化水解速率的 252.6倍，超过目前丈献报速的该奥水解模拟醉水解能力近2.5倍. 关扭词 分于印进，棋拟杭体醉，纳米隧道，催化水解 酶用于毒剂侦检已有很长的历史，但天然酶受其种类、稳定性及价格的限制应用范围始终 有限。抗体酶的研究为人类自己设计制备新型催化剂打开了一条新路，使醉制备人工化的发展得 以在新的平台上展开。但是，由于抗体酶制备中仅仅是半抗原通过人工设计合成或人工筛选的， 而产品的最终获得仍必须借助生物体，因而它除了具有可按人的意愿制得所需酶以外，仍保留了 酶的难分离纯化、不便储存、易失活、价昂等不足。面对着抗体酶这些既诱人又棘手的特点，以 Mosbach等为代表的科学家率先提出了以分子印迹方法制备 “人工抗体酶”的思想。该方法既引 用了抗体酶通过底物过渡态类似物获得催化体系的思路，又利用了分子印迹技术实现了在高分子 基质上构筑识别、催化、结合洞穴，可以说是催化抗体人工化的一条重要途径。从目前的进展情 况看，此技术发展比较顺利，1993年Mosbach等人成功的完成了催化4-氟一 (对一硝荃苯基)-2- 丁酮‘的HF的p一消除21,1994年Shea,K.J.又成功的完成了催化3-M基丁醛的缩合反应E1。唯 一遗憾的是对狡酸醋水解的分子印迹模拟酶研究的进展一直不佳，直到1997年，以Wulff为代 表的研究小组才使这一工作有了一次突越，其催化水解效能从以前的几倍提高102倍4[[1。当然， 这与抗体酶比，还有一定的距离。鉴于分子印迹模拟酶目前的研究状况以及美国Hopkins大学的 Jenkins,A.L.等人利用该技术侦检梭曼时表现出特有灵敏性((loppt)151的特点，结合我们自己发 展新的毒剂侦检试剂的需求。我们系统的研究了分子印迹模拟酶结构与催化性能的关系，结果发 现:分子印迹模拟酶的结构与模拟酶的催化性能有着十分密切的关系，尤其是 “纳米隧道”的引 入，可以直接提高分子印迹模拟抗体酶对狡酸酷的催化水解性能，其催化水解能力最商可达未催 化水解速率的252.6倍，超过目前文献报道的该类水解模拟酶水解能力近2.5倍。 实验 593 --— 一一一甲尸，一一一a}2一一.一一 一 周两肠面翻..侧州辫叫肚扣以;{像摊 1.1仪器 熔点由X-4显微熔点仪测定，元素分析用CARLO-ERBR1106CHN仪钡1定，IR由Nicolet-5XSC 型红外光谱仪测定，H尸CNMR用VarianUnity500型核磁共振仪测定 (TMS为内标)，Ms用VG platform型质谱仪测定，紫外及反应动力学由SHIMADZUUV-265FW分光光度计测定，电镜图用 HITACHIS-450扫描电子显微镜，pH用ORIONSA720团计。 1.2试剂 所有水解底物、模板分子、功能基分子、交联剂均由自己合成，经 IR,MS,H/七NMR, 元素分析和熔点测试等鉴定后使用，其余化学试剂均为分析纯试剂。 1.3模拟抗体酶的合成 模拟抗体酶的合成是我们利用量子化学计算找出按酸PEI水解过渡态、确定模板分子结构后， 通过设计模拟酶的功能基。并推算出所设计的模拟酶的水解效能后进行的。合成工作的一般步骤 女口卜: 取功能基化合物2mmol,溶于24m1DIM 中，仁然后，加入524.8mg(2mmol)COCK·H=O, 搅拌Ih后]，加入模板化合物1mmol，室温下搅拌1h，加入适量交联剂和531mgZnO纳米材料， 搅拌均匀后，再加入35.4mg偶氮双异丁睛，脱气三次后，在氮气保护下搅拌升温至60℃，反 应70h，得到固