由液相色谱仪 - 仪器信息.docVIP

1、一般地，传统的单一检测器的GPC，例如：由液相色谱仪改造而来的GPC，只需要进样量20ul（微升）或稍多，而且对浓度没有很精确的要求，一般只有一个浓度范围。这个范围对应于柱子的分离能力和检测器的量程。而浓度的具体大小，则也与分子量有关系！当分子量越大时，浓度应该减小；反之，浓度应该增大。但是浓度太大，则会出现堵柱子，而且也会使检测器出现平头峰；浓度太小则会出现检测器检测不到信号的情况。一般都在几毫克/毫升的浓度比较合适。对于先进的多检测器GPC，则进样量要大很多了，至少也要50ul，甚至100、200ul也不稀奇。这样算下来，样品量就不少了。之所以说可能需要很多样品，是因为与具体方法有关。如果样品本身是没有经典的GPC方法，需要摸索、建立一个新方法的话，那么样品需要量确实会大一些，特别是对一些新合成的样品，你很难确定他用什么溶剂溶解样品更合适，这时候就需要你去尝试，此时样品消耗是很大的！例如，我在仪器信息网上介绍过的聚乳酸样品的情况就是如此：当样品高度支化甚至成为星形支化时，传统的THF溶剂已经不能用了，需要换溶剂！而做出这一判断也是非常难的！在这一过程中，样品的消耗是非常大的，虽然浓度很低。但是由于进样频繁，所以配制的样品溶液，会较快消耗。此外，样品量过少，也会带来样品典型性差的问题。所以，在工业生产企业的质量检验中，往往需要较大的样品量来配制成较多的样品溶液以避免典型性不足的问题，尽管实际进样量很小。样品量少，往往是由于聚合规模小，实验室的小型合成，或者样品是昂贵、难得的生化类样品，如：蛋白质、多糖等。解决这类问题，可以选择微量GPC，但是价格非常昂贵。一般地，聚合物都不存在这类问题，无非是多聚合些样品出来，样品本身不是很值钱。而对于生化类样品，一般GPC就没办法了，要么多弄些样品，要么买微量GPC。但是一般也是选择前者，因为你还需要作重复性和重现性呢，并不是做一次进样就完了！最起码要进两针啊。如果遇到柱效有问题，那么你还需要重新做标准曲线。GPC可以改用不同流动相，包括水，DMF，CHCl3，THF等，但是要配备不同的柱子。楼主说流动相中要加入少量的三乙胺，主要原因是用THF做流动相时，聚合物出峰不是很好，有时候峰比较宽，PDI就上去了，这种情况往往出现在聚合物中含有很多阳离子或阴离子。正常的聚合物测GPC是不需要加三乙胺的。如果楼主做过HPLC就知道了，HPLC中流动相往往都需要加入三氟乙酸或者氨水，这样有利于出峰的峰型好看，好准确测定其保留时间。呵呵，难道紫外检测器不是通用型检测器吗？确如你所说，示差折光检测器存在这样那样的不足，但是由于绝大多数聚合物没有紫外吸收，或者紫外吸收很弱，所以示差折光检测器也就应运而生了，而且在GPC中得到广泛应用。目前，示差折光检测器的地位，还是无法替代的，尤其是随着激光散射检测器的广泛应用，RI更是不可或缺的了，这也是紫外检测器所无法比拟的。何况，虽然RI检测器灵敏度稍低些，但是由于激光散射检测器LS灵敏度远高于紫外检测器，而且一步得到绝对分子量，所以RI与LS的结合，不仅具有更强大的功能、更多的数据信息量，而且灵敏度、精度和重现性都更好，于是就把紫外UV远远甩在身后了。紫外之所以落后就是因为在LS中，需要一个数据：dn/dc值，这个数据可以由示差折光检测器得到，而紫外不能！所以，LS需要与RI结合而可以不需要UV了。此外，根据样品分子量大小，改变样品浓度或者进样量，以及配置脱气机，都可以提高GPC系统的灵敏度和分析效果。特别是脱气机，对于本体粘度较小的流动相，不配置脱气机，就会造成气泡影响色谱图基线，从而影响分析效果，那么紫外UV再灵敏也是没用的！一般来说，GPC的柱子在第一次经过溶剂之后就不能再进行更换，原因在于凝胶在不同的溶剂里面的溶胀率是不一样的，如果大量其他溶剂进去的话柱子就报销了。GPC的柱子溶剂有很多可以选，THF，DMF，H2O，CHCl3都是可以的。如果是在上海的话，我记得华东理工大学是可以测氯仿的流动相的。 作者：501Visco 用过DMF 的柱子换用氯仿，也是可以做到的；但是，由于DMF体系常需要加入氯化锂、溴化锂，所以当换用氯仿时，可能这些盐会析出从而堵塞系统，因此首先需要用中间溶剂淋洗，例如：乙醇，然后再用氯仿洗柱子，而且全用小流速，0.1或者0.2ml/min，顺便连仪器系统也洗了。这个过程时间可能挺长的。但是，用中间溶剂淋洗，容易造成柱效下降——溶剂对固定相可能会有影响，所以最好还是不换，DMF的柱子就专用吧。在DMF里不溶，可考虑升高温度、加盐再试一试。DMF体系难度很大啊，那个盐需要很高纯度的，最好是进口的、色谱纯或者光谱纯的。但是，如果能用THF或者氯仿溶解，那最好还是用这些溶剂吧，因为DMF太难、太麻烦，柱子损耗太大、