核酸的理化性质及其应用.pptVIP

第五节 核酸的理化性质及其应用 一、一般理化性质 酸性 DNA粘度极大，RNA粘度比DNA小 得多 在260nm波长有紫外吸收峰，是由 碱基的共轭双键决定的。这一特性常 用作核酸的定性、定量分析。 二、DNA的变性 概念：在某些理化因 素作用下，DNA分子互 补碱基对之间的氢键断 裂，使DNA双螺旋结构 分开成单链。 变性因素： 加热、过量酸或碱。 增色效应：DNA变性使溶液OD260增高。 解链温度(Tm)： DNA的热变性 过程中，紫外光吸 收值达到最大值的 50%时的温度。 Tm值与DNA 分子中的G+C含量 呈正比。 三、DNA的复性与分子杂交 复性：变性DNA在适当条件下，两条互补 链又重新恢复天然的双螺旋构象。 退火（annealing）：热变性的DNA经 缓慢冷却后的复性。 减色效应：复性后，DNA的OD260又降低 到原来的水平。 核酸分子杂交(hybridization)： 热变性的DNA在复性过程中，具有碱基序列部分互补的不同的DNA之间或DNA与RNA之间形成杂化双链的现象。 * *