单分散多孔交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯微球基质高效亲合色谱填料地研究.pdfVIP

P-025 单分散多孔交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯微球 基质高效亲合色谱填料的研究 龚波林 耿信笃 (西北大学现代分离科学研究所，现代分离科学省重点实验室，西安710069) 亲合色谱具有高选择性，可从复杂生物体系中高效、快速地分离出期望的目标产品，在生命科学和 胶或中等强度作基质，但这些介质存在着受压易变形的缺陷，限制了其在实际应用中的快速纯化和生产 效率。硅胶是高效亲合色谱中最常用的一种基质材料，它有很高的机械强度，颗粒均匀，柱效率高，但 这种介质只适宜pH在2-8的范围内，而且表面的非特异性吸附也使得它在生化物质的分离、分析中受到 限制。合成的高分子聚合物基质交联聚苯乙烯，交联聚甲基丙烯酸酯等树脂，具有较好的机械强度和良 好的化学稳定性等优点．本文选用甲基丙烯酸环氧丙酯(GMA)为单体，亚乙基二甲基丙烯酸(EDMA) 为交联剂，采用一步种子溶胀聚合法制各了单分散交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯树脂(PGMA)，以氨基葡 萄糖为配基，制备了氨基葡萄糖一PG姒高效亲合色谱填料，对其表面环氧基浓度进行了表征，并以氨= 葡萄糖为配基．首次制各了纯化Concanavalin A(Con—A)以氨基葡萄糖为配基的聚合物基质的高效亲合 12．5 色谱柱。配基在PGhIA上的键合量为8．2mg／g，对Con—A的吸附量为mg／g，使用该亲合色谱介质 亲和填料的合成． 以醇类为反应介质，用分散聚合法所制备的颗粒单分散的线性低分子量聚苯乙烯(PS)微球为种子， 用GMA为单体，EDMA为交联剂，在含有稳定剂聚乙烯醇和表面活性剂十二烷基磺酸钠的水相介质中， 用被乳化的GMA，EDMA，过氧化苯甲酰和邻苯二甲酸二丁酯混合物，于室温下对种子进行溶胀10h， 然后在70℃条件下搅拌聚合24h．聚合产物用热水、甲醇、丙酮充分洗涤并用甲苯抽提48h，即可获得颗 醋酸水溶液氧化为醛，醛基化的树脂用0．5％NABl-h水溶液还原为一元醇，然后在无水二氧六环介质中用 1．1’．二咪唑甲酮活化。活化的PGMA键合氮基葡萄糖盐酸盐，即可制得纯化Con—A的高效亲和色谱填料。 PGMA树脂表面环氧基浓度的测定 我们合成的PGIvIA是一种新型的高分子树脂，颗粒单分散，多孔，交联度40％，具有机械强度高的 特点，可进行快速洗脱，表面的环氧基易于进行修饰，水解后生成二元醇，形成亲水性表面，具有很好的 生物相容性。 肼反应来检测环氧基浓度，从而计算环氧基浓度．PGMA树腊的环氧基浓度为25．3mmo瞻树脂。表明该 树脂的环氧基浓度较高． 洗脱剂a一甲基一D一甘露糖苷浓度对Con—A保留的影响 洗脱的适宜浓度。 粗品Con．A的色谱分离纯化及SDS—PAGE电泳分析 PBS+0．2 10．0 mol／L mol／LNaCl+1．0 mg／mL的粗品Con．A用平衡液配置，经离心后上样并用A液(0．05 a一 mmo|／LCaCl2+1．0mmol／LMnCl2，pH娟．O)平衡10min，然后用B液(洗脱液)：(A液+30．Ormnol／L 甲基一D_甘露糖苷)，脉冲洗脱。如图1所示，其中第一个峰为样品中不与8-氨基葡萄糖发生特异性作用的 用SDS—PAGE检测收集液中Con—A的纯度。如图2所示，电泳显示纯度高达95％。 0 5 t／rain 图1．粗品Cou-A的亲台色谱分离圈 1 2 3 ofcrudeCon-A 图2．Con-A的电泳分析圉． Fig．1Separation by SD