基因探针-分子杂交技术.pptVIP

基因探针 ——分子杂交技术 基因探针 基因探针，即核酸探针，是一段带有检测标记，且序列已知的，与目的基因互补的核酸序列(DNA或RNA)。 分子杂交技术的分类 根据其检测对象不同，可分为 基本操作程序 Southern杂交 检测样品DNA的处理 提取检测样品的基因组DNA 用限制性内切酶对其进行酶切，至大小不同的DNA片段 电泳分离及变性处理 琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段 转移并固定到滤膜上 通过毛细管虹吸法，将凝胶上的DNA转移到硝酸纤维素膜或尼龙膜上。最后通过紫外线照射将DNA固定在滤膜上。 转移的方法 毛细管虹吸法、电转移法、真空转移法 探针的制备 一、探针的合成 PCR、化学合成等方法 二、探针的标记 同位素：3H、35S、32P等 非同位素：地高辛、生物素、荧光素等 杂交 预杂交：将结合了DNA分子的滤膜先与特定的预杂液进行预杂交，也就是将滤膜的空白处用鱼精DNA或牛奶蛋白封闭起来，防止在杂交过程中滤膜本身对探针的吸附。 杂交：在一定的温度和溶液条件下，将标记的探针与滤膜混合，如果滤膜上的DNA分子存在与探针同源的序列，那么探针将与该分子形成杂合双链，从而吸在滤膜上。 检测与分析 1、放射自显影：适用于放射性同位素标记的探针 2、比色或化学发光检测：适于非同位素标记的探针 通过放射自显影或生化检测，就可判断滤膜上是否存在与探针同源的DNA分子及其