细胞培养中与研究方法.ppt

2.细胞计数 血球计数板计数法 电子计数仪计数法 二、细胞活力测定 细胞活力测定是肿瘤体外研究中应用最广的技术手段之一。? 任何培养瓶内生长的细胞都由死细胞和活细胞组成，从形态上区别死、活细胞是困难的。 1. 细胞克隆形成率实验 测定单个细胞的增殖能力 单个细胞在体外增殖6代以上，其后代所组成的细胞群体形成肉眼可见的克隆。克隆形成率用来表示细胞的增殖能力 克隆形成率比＝克隆形成数／接种细胞数 缺点：操作繁琐 优点：精确、可靠 常见方法：平板克隆形成试验、软琼脂克隆形成试验 3. 四唑盐（MTT）比色法 测定细胞存活和生长。 快速、简单、灵敏度高 3.原位切口末端标记法 （原位细胞凋亡检测，TUNEL） 原理：细胞凋亡时，内源性核酸内切酶使核小体内DNA断裂出现缺口，产生一系列3‘-OH 末端。生物素（biotin）标记的dUTP 在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）的作用下与3‘-OH 末端连接，并与连接了的辣根过氧化酶的链霉亲和素（Streptavidin-HRP）特异结合，加入DAB显色底物可在原位出现棕沉淀，镜下即可观察和计数着色细胞； 正常或正在增殖的细胞几乎没有DNA 的断裂，因而没有3’-OH 形成，很少能够被染色。 组织样本和细胞样本（细胞涂片）均可检测。 优点：对完整凋亡细胞进行原位染色，能准确反应凋亡细胞典型的生化和形态特征，极少量