慢病毒转染大鼠骨髓间质干细胞条件优化与其性质研究.pdfVIP

慢病毒转染大鼠骨髓间质干细胞条件优化 及其性质研究 张徐1朱伟1王梅1曹慧玲1徐学静1钱晖1许文荣1,2 1.江苏大学基础医学与医学技术学院，江苏镇江，2120132.江苏大学附属医院医学检验中心，江苏镇江， 212001 摘要：目的 建立慢病毒载体稳定转染大鼠骨髓间质干细胞的方法并研究转染后细胞性质。 方法 采用基于HIV-1的VSV-G假膜化的慢病毒载体转染大鼠骨髓来源的间质干细胞；研究 不同转染条件包括感染复数、感染方式、感染次数对转染效率的影响；通过流式细胞仪检测 转染后大鼠骨髓间质干的绿色荧光蛋白表达情况；通过PCR和RT-PCR检测慢病毒基因整 合至大鼠间质干细胞基因组情况；有限稀释法克隆单个慢病毒转染阳性大鼠间质干细胞，体 外研究其生长动力学，细胞周期，细胞核型和分化能力，体内研究其向缺血再灌注大鼠肾损 伤部位迁徙情况。结果 利用慢病毒高效感染大鼠骨髓间质干细胞，转染效率达95％以上。 转染效率和荧光强度随感染复数增加而升高；离心力作用下感染效率为静态作用下的两倍以 上；在感染复数为12.5时连续感染两轮后转染效率从39.1±2.7％升高至62.4±1.7％，两轮 以后转染效率无显著升高。PCR证实慢病毒基因稳定整合至