硝基磺酚S作为氢供体度物测定过氧化氢地研究.pdfVIP

第十届拿国有机分析学术研讨会 硝基磺酚S作为氢供体底物测定过氧化氢的研究 朱敏3袁倬斌8沈含熙6聂军6 100039 (‘中国科技大学研究生院化学部．北京 6南开大学化学系．天津300071 。中国大冢制药有限公司．天滓300382) 关键词过氧化物酶硝基磺酚S底物 ’ 接要本文首次报道了一种新的过氧化物酶氢供体一硝基磺酚s，研究_：r不同酶和底物浓度 3．6条件下米氏常数I(．为7．85×10 下的稳态催化动力学，计算了pH 5molL～，V。为2．75×10‘S’ 利用过氧化物酶催化下的硝基磺酚S的断裂，测定了水溶液中2×107～2．5×10。5molL‘浓度范 围的微量过氧化氢． 过氧化物酶法分析过氧化氢被广泛应用于各种生物样品的分析测定中。此法所利刚的氨 进行，易受血清中胆红素的干扰。苯酚法和苯胺法的灵敏度较低，难以与某些氧化酶(如单 胺氧化酶和尿酶)联用和用于微量样品的测定，且试剂稳定性较差。染料隐色体作为底物有 较高的灵敏度，但试剂稳定性更差，通常室温下仅能保存24小时。上述氢供体底物的氧化 产物均为自身的二聚体或与其它物质的偶联产物，我们前文曾报道一种偶氮萘酚类物质一铬 黑T作为职P的底物测定过氧化氢，由于其本身是￡值很高的有色物质。氧化后发生断裂反 应，较好的克服了试剂储备液易氧化和灵敏度低的问题，是一类具有完全不同的反应机理的 新底物。本文研究了此类物质中的硝基磺酚S作为HRP底物的性能，用于过氧化氢的测定， 结果令人满意。 一 1 实验方法 5moiL’)溶液，迅速在 下恒温20分钟后，加入0．ImLH。02(最终浓度为3．0×i0。一3．0×10 2动力学常数的测定 ． X X 1Ls 1。 10 10。tool 10。S‘．k：7．853molL‘，I(c。。=3．03 1，k。。／K-．3．86×109mol。L‘S 3最佳反应条件的选择 实验了pH、温度和试剂浓度对测定的影响，pH在3。5～4．0范围内对测定最为有利。 8moiL 1时，反应住 反应温度在35℃～50℃范围内酶活性达到最高。HRP用量为5．0×10 最低用量为1．2×10一moiL，40℃下20分钟完成测定。 4分析特性 Dll ，磐； ：潍 二翻■■■黉搿9 第f‘届伞图有机分析学术研讨会 X10‘Lmol1cm 0．9936(士0．007)，表观摩尔吸光系数￡。为2．52 1，是Trinder体系的I．2～4 倍。测定1．0×tO 5mo吨IH。0：相对标准偏差为0．5％(n=7)。 参考文献 I PTrinder．AnnClin Biochcm．1969；6：24 Chemica