一种高效快速的色谱新技术-超临界流体色谱在生物化学中应用地研究.pdfVIP

内蒙古大学学报(自然科学版) ActaSeieatiarum Un Z001年7月 NaturaliumLversitads NeiMongol 一种高效快速的色谱新技术一超临界流体色谱 在生物化学中应用的研究’ 郭永明 (集宁师范专科学校化学系，内蒙古集宁012000) 摘要：超临界流体色谱是一种高效快速的色谱新技术，具有气相色谱和液相色谱的优点，应用 SFC对泛醌、红霉紊和霉菌毒素进行丁分析研究，结果表明SFC适用于分析挥发性较小，热不 稳定的生物大分子． 关键词：超临界流体色谱-分析；生物大分子 Fluid 超临界流体色谱(Supercritical 快速的色谱新技术．SFC所使用的流动相是超临界温度和压力的高度压缩的气体，兼有气体和液体 的特性，密度大而粘度小，具有与液体相似的溶剂化性质和接近气体的扩散性质．因此，SFC结合有 气相色谱和液相色谱的优点，适用于分析挥发性较小，热不稳定的生物大分子01． 一般而言，填充柱SFC适用于组分简单的快速分离，而毛细管柱SFC则适用于复杂混合物的分 析．近年来，两者都开始用于生物大分子物质的分离和鉴定。． SFC能与许多新的快速测定技术联用．例如：质谱、紫外、荧光及火焰电离检测器等，这就更加提 高了它的分析效率和灵敏度． 1原理 当物质达到其临界温度时，气相和液相具有相同的密度，若超过临界温度，无论施加多大的压力· 气体也不能被液化．超临界液体就是一种超过其临界温度和压力的气体，表1列出了一些常用流体的 临界参数． SFC的特性在于采用了超临界流体作为流动相．在此条件下，超临界液体的密度接近液体的密 度，因而具有液体相似的溶剂化性质，在低温下可以溶解许多物质．但其粘度较低，溶质的扩散系数比 在液体中的扩散系数约高两个数量级，介于气体和液体之间．园而，SFC兼有气相色谱(Gc)和液相色 谱(Lc)的优点，在较短的时间内，可以达到较高的分析效率．表2列出了色谱技术中几种重要的参 数． 衰1一些常用流体的临界参敷 表2重要色谱参教 基于超临界液体的特殊性质，SFC能够分析挥发性低、热不稳定或高分子的物质，而且超临界液 体作为流动相的溶剂化强度可以作为压力(或密度)的连续可变的函数．因此，如同在气相色谱中使用 程序升温，在液相色谱中仅用梯度洗脱一样，在SFC中可应用程序升压技术以进一步提高分析效率． ·收稿日期，2001—05—10 内蒙古大学学报(自然科学版) 20。1年 目前所用的超临界流体仅限于COz、N。O、NH，、烷烃等少数几种．其中最常用的为CO。，这是因 为CO：有较低的临界点，价廉易得，无毒，化学惰性，而且可与紫外吸收和火焰电离测定等联用．但由 于COz为非极性分子，一般只限于溶解非极性化台物．添加一些极性物质，例如甲醇，可以增强它对 极性分子的溶剂化强度．由于惰性气体氙的透光性好，最近也有使用氙作为流动相的报道． 2应用 2．1细菌中泛醒的分离和测定 泛醌是由苯醌和不同长度的类异戊二烯侧链构成的，这类化合物在细菌的电子传递和氧化磷酸 化中起着关键的作用．我们用填充柱SFC鉴定了从Qe至Q。a的泛醌，色谱条件为ODS反相柱，粒子 直径3Hm，10m×4．6mm，流动相含1．5“甲醇的C02，流速为3．5cm3／min，线速1．0cm／sec，柱温 40C，流动相平均密度为0．879／cm3，平均柱压232巴，柱压降69巴，检测器FID． 由图1可见，这类结构相似的化合物可以得到很好的分离，而且SFC的保留时间与TLC的Rt 值在很大程度上是相关的． 2．2红霉素(MW734)的分析 这是采用毛细管柱进行药物分析的最新方法，其色谱条件为：19m×80pm聚甲基氢硅氧烷去活