沙冬青抗冻蛋白热滞活性的DSC的研究.pdfVIP

沙冬青抗冻蛋白热滞活性的DSC研究 陈滔滔周晓蔷王保怀’李芝芬 (北京大学物理化学研究所，北京，100871) 费云标魏令渡高素琴 (中国科学院发育所，北京，100080) 在某些极地鱼类的血清中以及某些昆虫和植物中，人们发现了一类特殊的物质．它们的共同 特点是能通过直接与冰核相互作用，抑制冰核形成和生长，从而降低溶液球点．现已发现的这类 性称为热滞(Hysteresis)．所以抗冻蛋白也叫热滞蛋白或温度迟滞蛋白(Thermal Hysteresis Proteins，THP5)本文用差示扫描量热法(Differential Scanning 片中提取分离得到的16种组分进行了热滞活性的测定，发现其中的一种具有明显的热滞效应， 并观察到其不可逆相变的热力学过程，证实了高效双峰热效应的存在． 实验部分 。 本实验所用抗冻蛋白由中国科学院发育所提供．捣碎的越冬沙冬青叶片经热处理、硫酸铵沉 Celluose 淀，取上层清液，进行DEAE 后通过制备性等速电泳分离得到处于不同电泳谱带的各蛋白质点．对于电泳分离出来的前四个大 峰，每个大峰又细分为数个小峰，以P，。Sx标号区分，共分为16组．将蛋白质配制成20mg／ml 水溶液．蛋白质浓度由双缩腺法确定． 市售牛血清白蛋白(第五组分，BSA V)，加重薰永配书j成20mg／ml的溶液，进行对照实验． DSC Ill型差示扫描重热仪．对 本实验采用法国SETARAM公司生产的生物医药专用Micro 先 每一个样品进行如下的DSC实验．取3．5山的样品注射于样品池底部中央，以空池为参比． C／rnin的速率缓慢升温至10C，从热流一温度／时间图上计算样品熔点T。及熔融培△H。．然后如 测得的样品熔融蜂所涵盖温度区间中的某一温度(称为停留温度，Hold Temperature，k)，使样 品处干部分熔融状态，再平衡15rain，使蛋白与冰核充分作用．并使体系达到平衡．复以同样速 曲线隶得不同停留温度下体系的冰核含量及样品的熟滞活性． 结果与讨论 ． 表1列出了BSA溶液的一部分实验数据．冻结一熔融热流一温度图见圈1． 1．The centicenucleiandTHAofBSAsolution Table hold fro)，per temperature temperature(10，onset TJ℃ ．0．65 --0．60 -o．55 —0．50 ．o．45 -0．40 -0．38 —0．35 。 Tj℃ ．0．65 ．0．60 ．0．56 -0．50 -0，45 ．0．40 -0．37 T产13．61 Nuclei／％ 93 92 89 80 35 十 ’0 THA／C 0．00 O．00 0．01 O．00 0．00 0．00 -0．01