生物大分子分离和色谱柱结构关系的研究.pdfVIP

——一坌堑些茎塑生些量垫堡——一—— 生物大分子分离与色谱柱结构关系的研究 张养军耿信笃 (西北大学现代分离科学研究所西安710069) 关键词 高效液相色谱 生物大分子计量置换保留模型 分离度 随着生命科学的迅猛发展，生物大分子的纯化和制备就显得愈来愈重要。高效液相色 谱(HPLC)因具有高教、快速和适用于制备等特点而成为强有力的手段，也受到愈来愈多 的重视。针对生物大分子的分子质量太，在色谱柱上迁移速度小，具有生物活性的特点， 在选择色谱分离模式上一般选用以盐水为流动相的分离体系。特别是在我们提出疏水色谱 不但能用于生物大分子的有效分离，还能同时对其进行复性后fII，疏水色谱用于分离纯化生 物大分子方面更加受到注意并获得广泛的研究和应用。通常色谱柱的台理结构的长，径比为 10。而色谱中分离度从来都是与塔板数成正比，当然与柱长成正比。但对于生物犬分子而 言，常常认为柱长对分离度影响不大。刘彤等12J根据计量置换模型(SDM．R)I∞和生物犬分 子在色谱柱上z值(1tool溶剂化溶质吸附于溶剂化固定相对，从二者接触表面释放出的置 换剂的量)具有较大的差异，提出了分离生物大分子的短柱理论，并依此设计君J制造山“饼” 型对蛋自进行复性及同时纯化的制备装置，并用此装置对6种蛋白进行了较满意的分离， 从而进一步验证了该结论。此外，该装置可使用小颗粒填料，分离效率高．时间短，负载 量大，系统压力低，已成功地应用于重组人粒细胞激落因子、干扰素、白细胞介素_2莆I胰 岛素的分离、纯化及复性中。色谱柱的设计(包括柱型、结构、填料和装填方法)或称柱 技术对液相色谱的发展起着至关重要的作用，但用于生物大分子分离中的柱结构，如柱 长／径比对分离度的影响尚无定论。为此，我们采用疏水色谱对不同的柱眭，梧!比与分离度的 关系进行了研究。 1实验部分 所用仪器为日本岛津公司生产的LC-6A高效液相色谱系统。固定相为我所台成的硅胶基质 疏水填料。流动相为：A液：3 moFL mol／L mol／L(N}LhS04+0．05KH2P04(pH=7．O)和B液：0．05 2结果与讨论 mill×4．6mm1．D．10mm×4．6mmi．d．， 分别将高压匀浆法装好的不同规格色谱柱(100 x Ld．，10mm 10him×10mmi．d．，10mm×20mm50mmi．d．)装于色谱系统中．在上述条 们的分离髑1看，不同长，径比的柱子都能将7种蛋白完全分离开。一个令人吃惊的事实是 图1所示各谱图是有一个柱长，径比己达到0．2所得。这说明在蛋白质的色谱分离中．由于 t。值随水的浓度变化而发生很大的变化，亦即蛋白质的色谱保留行为主要由流动相的组成决 定。趴图l所示的用制各型装置对7种标准蛋白的色谱分离图(图中峰l，2分别为溶剂峰 分析化学的成就与挑战 和杂质峰-3～9峰则为该7种蛋白分离图，总进样量为2．1 MPa～O．2MPa) mg，柱压为0．1 mm 与通常使用的100mill×4．6i．d．色谱图相比，其分离效果相当。但后者的总进样量要小 得多-柱压约为10MPa左右。有时也会发现随着柱长，径比的增大，分离度变差，峰形变宽， 这是由于柱头填料不平整，装填不紧密所致。这种现象在大直径柱子中尤为突出，我们采 用特殊的柱结构解决了这一问题，获得了满意的效果，为今后用于制备型大直径柱的设计 和制造奠定了基础。 “卜五＼锄n 围1 在静I备型色谱柱上7种蛋白质的色谱分离 参考文献 I 耿信笃等．高技术通讯，1991，1(7)；1 2