肽核酸化合物的MALDI-TOF质谱的研究.pdfVIP

舟析化学的成就与挑战 肽核酸化合物的MALDI-TOF质谱研究’ 熊少祥辛斌王光辉刘国诠 (中国科学院化学研究所北京质谱中心北京100080) 关键词基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱肽核酸结构表征 nucleic 肽核酸(Peptideacids，PNA)是—类新型的脱氧核糖核酸跳谟似物11I。与DNA 不同，在PNA中，嘌呤、嘧啶等碱基连接在多肽的基本骨架上，但其碱基仍然具有配对的功能， 【园而具有很大的生物技术应用前景而受到人们的重视。近年来，PNA已用于生物传感器啪、基因 治疗药物pJ、抗癌药物p1等领域。对较小的肽核酸分子．虽然可以采用快原子轰击(FAB)进行 质谱分析吲，但存在分子离子峰信号弱，样品消耗量大等缺陷．对大一些的肽核酸分子，则难以 得到检测信号．FAB质谱分析发生困难。 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALD[-TOF-MS)是近年来发展起来的一种“软电离” 质谱方法，它具有容易获得较强的分子离子峰的优点，在多种类型的化合物质谱分析中得到广泛 的质谱分析非常有效，在基质辅助作用下，样品受激光照射，很容易离子化，生成单电荷分子离 子，非常方便地得到灵敏度高、分辨率好、易于识别和解析的质谱图。为此类化合物的质谱表征 提供了一种新的高效分析方法。 l实验 所用仪器为BEaker公司的BIFLEXgl型基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪，配有氮激 光器．波长337 kv．反 extraction)和反射的工作方式。加速电压19 nm，采用延时引出(Delayed kV～16．5 ns～200 射器电压20 kV，延迟时间50 kV，延时引出电压14．5 Ils．正离子分析。质谱 图为lO次～50次单次扫描信号的累加结果。 肽核酸化台物为北京医科大学天然及仿生药物国家重点实验室合成，其基本结构组成示于 图1。以膳腺嘧啶为碱基，随基本重复单元数目(n)、两端取代基团(R．，R2)的不同．形成了 一系列的肽核酸化台物。而且，由于重复单元中与羰基相连的碳原子的手性特征，选用不同构型 的手性原料，可以合成出不同构型的光学异构体。 R1—}_NH一{2：1-t2cH2c ’中国科学院“九五”重大项目资助课题。 1080 分析化学的成就与挑比 选用∞氰基肉桂酸(CCA)或二羟基苯甲酸(DHB)为基质，溶于含1％三氟乙酸的甲醇 水溶液中，配制成一定浓度的基质溶液。固体样品溶解于基质溶液，取1“L样品溶液，滴加在 样品靶上，待}骞j=iⅫ挥发，样品结晶后．送入质谱仪，进行质谱分析。 2结论 9*9肽核酸化合物的MALDI-TOF质谱分析结果表明：选择适当的仪器操作条件，该类化台 物容易解吸电离生成单电荷的分子离子，得到同位素峰之间基线分离的质谱图，分辨率大于4000。 一般情况下．与分子离子有关的呻+嘲+、附+Na]+、[M+Kr峰会同时出现。根据它们之间的 质量数差值，可以很容易确定被测物的质量数。适当增加样品制各时溶液的酸度，会较大地提高 【M+川+峰的强度，并抑制碱金属加合离子的形成。 选用CCA或DHB做为辅助基质，均可得到很好的质谱分析结果，且基质与化台物的混台 比例要求并不严格，在一定的范围内均可。但通常用CCA制样比用DHB结晶更好．操作更为 简单。该法样品消耗量小，检测限约为frnol数量级，这对于那些经过艰难合成才得到极少量样 品的质谱分析极为有利。 参考文献 1 NieLgmPE CULT．OpinBiotechn01．，1999,IO(1)：71 2 WangJ，Bioma．s_Bioclcctron．，1998，13(7-8)：757 3 NielamPE