舟山眼镜蛇(Najaatra)蛇毒细胞毒素(cytotoxin)对小鼠移植性肿瘤的抑制作用与毒理学研究.pdfVIP

舟山眼镜蛇(Ⅳc咖口f，n)蛇毒细胞毒素 及毒理学研究 刘广芬1许云禄1王晴川1睬振斌2 (1．福建医科大学蛇毒研究所福州350∞4；2．福建医科大学电镜研究室福州3500舛) 眼镜蛇毒中含有多种酶类及毒素，如神经生长因子、神经毒素及含量较多的细胞毒素 等，各实验室按其观察重点的不同称呼各异，如膜毒素、细胞毒素、心脏毒素及直接溶解因 子等。纯品的分子质量在6～7 kDa。本文报道本实验室对中华眼镜蛇(现称舟山眼镜 蛇)蛇毒中细胞毒素研究的部分结果。 1细胞毒素的分离与鉴定 30及Su． 050、Superdex 采用柱层析液相色谱法，前后经sP．sephade】【c50、s印hadex 75HRFPLC多步分离纯化，得到细胞毒素纯品，分子质量6～7如h，氨基酸分析含 perdex 62个残基，等电点10，为碱性多肽。本室将所得的细胞毒素制成注射液，定名为癌息定 注射液(．mjectiocarcId¨)。 2细胞毒素抗癌作用试验 采用下述常规方法： 2．1试管内抗癌细胞作用试验 按常规培养方法，测定细胞毒素的IC50(50％抑{}j癌细胞生长的浓度)。 2．1．1台盼蓝排染法 癌息定对MGC803(人胃癌细胞株)、D咂(人鼻咽癌细胞株)、 Hek(宫颈癌细胞株)的IC葡分别为1．78旭／hd、1．52增^11l、2．59腭艋。 2．1．2 r11l、1．24旭／瑚。 2．1．3sRB法SLll㈨arninB可与生物大分子中的碱性氨基酸结合，在515啪的 oD读数与细胞数呈线性关系，可用作细胞数的定量测定。癌息定对B16(黑色素瘸)、AⅢ (人肺腺癌)的Ic50分别为1．32帽／“、3．19嵋／“。从上述试管测定细胞毒素的抗癌活性 较强，多在3旭／rnl的浓度即有作用。 2．2在体抗癌试验 2．2．1按常规方法 用昆明种小鼠腋部皮下接种不同瘤株，种后48h腹腔或静脉注射 ·”1· 不同剂量(100、200或300旭·kg一1·d一1)，连用2～8d不等，结果如下(表1、2) 裹l癌息定小■对腹水癌作用(”=10，×3次) 2．2．2癌息定对癌细胞株作用的超徽结构变化 在含胃癌(MGC803)细胞株的试管 内加入癌息定便直接作用，小鼠腋皮下接种§l舳细胞株或腹腔内接种H＆(小鼠肝癌)细 胞株，随后静脉内注入癌息定注射液。作用后取细胞或细胞块制作超徽切片标本，供电镜 观察用，结果： 1．小鼠腹水型肝癌(H玉)：于接种后翌日给予癌息定500腭／(kg·d)．静脉注射×3do ①对照小鼠仅给生理盐水静脉注射。肝癌细胞体积较大，呈圆形或椭圆形，表面有少量微 缄毛，核形状不规则，常染色质较多，异染色质分布在核膜下。核仁易见，胞浆内核糖体丰 富，粗面内质网、线粒体、高尔基体正常，线粒体纵向嵴较易见。②小鼠给予癌息定3天后 取腹水癌细胞作电镜观察，见肝癌细胞表面微绒毛数量减少、变短，胞内细胞器略减少。 线粒体呈嵴型肿胀，基质密度较深，粗面内质网扩张，脱颗粒，细胞膜常见大小不等(长度 不一)的缺损带，有的核外膜亦可见小缺损，细胞浆水肿，核基质密度变淡或核溶解。少数 细胞核异染色质聚集成块，有少数凋亡细胞，其胞浆密度较深，有多个核膜包绕的核碎片 块。 2．肉瘤．180(S180)：s180细胞株接种于小鼠右腋皮下。对照动物给予生理盐水 均于第8天取瘤块，作超微切片，供电镜观察。 (1)对照：瘤细胞体较大，无连接，含丰富的核糖体及少量内质网、线粒体及高尔基 体。核大，不规则形，常染色质丰富，异染色质少，多位于核膜下，核仁明显或有多个核仁。 (2)给药组：核内异染色质增多，呈多块状分布于核膜下，个别核固缩，染色质堆积成 团，核仁明显，有的癌细胞核模糊不清或呈多个核碎片。细胞膜亦出现缺损，线粒体肿胀， 内质网扩张，核糖体减少。 2．3试管内培养的MGC一803(胃癌)细胞