1%2c5-二羟基萘作为伏安酶联免疫分析体系底物地研究.pdfVIP

1．5-二羟基萘作为伏安酶联免疫分析体系底物的研究+ 焦奎 要虹徐静张书圣 (青岛科技大学应用化学系，青岛266042) 本课题组曾报道了一系列联苯胺及其衍生物“’“、苯二胺及其衍生物”’“、氨基酚类”’ 6’物质为底物的伏安酶联免疫分析法。辣根过氧化物酶对lh02氧化这些有机化合物的反应 有很强的催化作用。酶促反应的产物分别为偶氮联苯化合物、吩嗪类或亚胺类化合物、和 酮或含羰基的化合物，这些产物均可在汞电极上还原产生良好的伏安峰，测定酶促反应产 物的伏安峰便可测定HRP的活性，从而建立起以HRP为标记酶的伏安酶联免疫分析法。我 们已成功地将提出的这些伏安酶联免疫分析体系应用于植物病毒烟草花叶病毒、黄瓜花叶 病毒、芜菁花叶病毒、南芥菜花叶病毒、南方菜豆花叶病毒、葡萄扇叶病毒、番茄不孕病 毒、马铃薯y病毒和烟草环斑病毒等的血清学检测，均具有很高的灵敏度。本文提出以 l，5一二羟基萘(1，5-DHN)为底物的伏安酶联免疫分析新体系。这个体系的酶促反应机理与 已报道的伏安酶联免疫分析体系的酶促反应机理完全不同。 以前报道的体系均是在未加 入HRP和H：如时，在底物有机化合物的伏安 曲线上没有伏安峰或只有很小的空白伏安 峰，加入}IIlP和№如后，产生良好的伏安还 原峰，HRP在一定含量范围内与伏安峰高具 有良好的线性关系。本体系则是，在未加入 HRP和H：0：时，在1，5-DHN溶液的伏安曲线 上有一良好的伏安还原峰，加入HRP和地02 后，伏安还原峰减小，HRP在一定含量范围 内与伏安峰的降低具有良好的线性关系。 1，5-DHN在碱性条件下很容易被空气氧化， 在未加入HRP和}k02的情况下，碱性介质中 的l。5-DE、i即被空气氧化生成5一羟基一1，4一 萘醌，此产物很容易电极还原产生良好的伏 图l线性扫描二阶导数伏安图．酶促反应 安还原峰：加入m咿和H如后，}Ⅱ沪催化也魄继 8．6B-l{；2：0．05 步骤：1：0．05mol／LpH DH8．6B-R+7．0×101mol／L 续氧化1，5-DI州的空气氧化产物5一羟基一1，4一mol／L mol／LpH8．6B-R+7．0 1。5-91酣；3：0．05 萘醌，生成一种非电活性物质。可电还原物质 ×101mol／L1，5_D矾+6．0×101mol／LH她 被催化氧化，含量减少，所以还原峰高降低。 +1．0×101 g／LIⅡlP． 以1，5-DHN为底物，测定游离HRP的线性范围 7-4．OXl0 是1．0×10 g／L，检测限为7．3×101g／L。用于烟草花叶病毒(TMv)提纯液的测 定，线性范围为25．0～340．Ong／mL，检测限为25．Ong／mL。对酶促反应条件、线性扫描二 ‘国家自然科学基金资助项目(NO 蒸!!旦全里皇坌堑丝兰兰查室堡望壅墨一—— 阶导数伏安法测定条件、HRP活性测定、酶促反应及HRP活性测定机理进行了研究，制备 了电化学还原物质并对其结构进行了鉴定。图1为1，5-DHN酶促反应体系的线性扫描二阶 导数伏安图。 参考文献 1 焦奎，张书圣，韦璐．ODA-I也O=-HRP伏安酶联免疫分析新体系的研究．中国科学， B辑，1996，26(I)：57～63 2 焦奎，张书圣，韦璐等．oT—FI如-IiRP伏安酶联免疫分析新体系．化学学报，1997， 55(11)：1121T1129． 3 焦奎，孙刚，张书圣．OP舻H202一}珏cP伏安酶联免疫分析体系酶催化反应的研究．中 国科学，B辑，1998，28(2)：157～163 4 牛淑妍，焦奎．生物酵}珏lP催化哦氧化间苯二胺反应的研究．化学学报，2000， 58：