水稻内生细菌的验证的研究.pdfVIP

型墨堡竺!查堑坐生翌堕塑堂塑望竺L———一———————二旦 水稻内生细菌的验证研究 刘云霞。张青文周明_I (中国农业大学植物保护系 北京 100094) l号)常规衷而ffTi毒分离种群议抗突变同摔蜩川{《· 摘要通过水稻阿。l^种(沈农31。、巾fI 再分离与原始分离种群的显著傩榆验，从生念学上证吏r水稻f』J生细伪的种类，1U镜·丛，坶切 片观察其存在于植物j雄4谨组织细胞内，并验证内生细阿山根部进人材’l物‘#I～。山生细，】‘J奇 土l血物牛u土火景的研究表明，E要内生细茼分离种群对两品种兀戥桶H，Jj：疆小币彤咧虬批 酯酶|I寸工酶谱的变化。 关键词水稻山生细茼同丁酶 植物内生细菌与寄主植物在长期共同进化过程。p形成密切的相’巨若系，从I’-76平 I)d。t。ur提取无菌葡萄_粜汁开始植物内生细菌的研究以来，至今止有数十种植物纰织的内 生细菌捌，类被分离和鉴定。尤其近午米，～些内生细菌被用作增产菌来凋节忤物‘I：K发育 或者作为载体菌在构建趟l々丁程生防卣中的应用，促进r内生细荫在定殖、刊1口}动患变化 和与寄—E互作关系等多方而的深入研究”1。I：1前对内生细菌研究较深入的植物是杯花，似 7￡ali菌对植 对植物不同组织和不同生育期内生细菌的特异性及普遍性则报道很少。至于ijJ 物生理，病理变化的影响，进入途径，在植物体内的部位，以及与哿主植物。玎作帆，纠并，J 面研究世少。 本文将在水稻内生细菌种群动态研究的基I}i}I{}二，报道从生态学、形态学两方而计水稃{ 内牛细菌的定殖、内生细菌的种类验I正，以及对寄七植物致病性及酯酶同工n“}普的牛理学 影响的研究结果。免嫂定位的种类惨定见“l乜镜免疫胶体金定位水稻内生细曲的研竞》‘。 l材料1j办法 1．1水稻栽培管理 栽墒品种：沈仅319(s：31，r1】日4号(／4)(-11：‘c农、世大学农学乐提供)。 分离内牛细菌的水稻栽j}=}同大田管理。回接内生细菌的水稻裁培于三角讹Ⅵs』R芥錾无 菌墒养。 1 2内生细菌的分离 茁期、分蘖期、孕穗期、乳熟瑚。 g鲜绀织，l1束7如哺℃， 1．2．2材料处理厦细菌培养参照、I{saglll的力法(199。)1取1 j，：，次氯隈钠溶液中 滤纸吸去水分，7j％乙醇浸5分钟，转入含f)．f]j％n-tnn×、100的o 3～10分钟(取决植物材料表皮组织的性质及生肯朔)，厄菌水冲洗，消薄纸吸千·1巧雌孵 ]。。髀 ①现正．-II|H农业科学院生物防精研究所工fF，北束 312 机物保护21世纪展望 无菌研钵中，加人9ml无菌水或生理盐；4(碎磨，取汁液依次稀释涂平板，恒温28℃，暗培 养2～3天。 1．2．3菌种获取与鉴定分离菌落以其形态、大小和颜色为基础，分组计数。随机每组取 一定数量保存。进一步在肉汁胨培养基．卜纯化，并进行革兰氏染色，相差显微镜观察，确 定其同～性．再各取两株4C保存，并dj微生物所细菌鉴定室协助鉴定其种名。 1 3致病性的观测 苗叶尖，以：无菌水做对照，保持湿度1～2月后观测生民状况。 1．4内生细菌的回接再分离 细菌抗药性标记：原始保存菌种分别接于肉汁胨液体培养基活化，取0．Iml适宜浓度 的稀释菌悬液均匀涂于肉汁胨平板上，28c腊培养1～2小时，紫外灯下照射1分钟，28C 暗培养2～3天。挑取培养性状与原始菌种相同的菌落，接种：j：肉汁胨液体培养基中，28。C lOOrpm振荡培养，至对数生长期加入100pg／ml利福平，过夜培养后取0．1ml均匀涂于含 100 ug／ml利福平肉汁胨平板上，选择与原始菌种相同的菌落。用同样的方法筛选同时抗 100ug／ml硫酸链霉素灼双抗菌株，塾E化后，使其在无药培养基上生长及在冰箱中过夜，