结核分支杆菌katG基因突变和其耐异烟肼机制的研究.pdfVIP

此间风疹流行、风疹病毒与MV合并感染有关。据临床表现将患者分三种类型，基本上反映了患者的病 情，有利于系统了解患者对Mv的免疫状况和利于采取防护及控制措施。 本资料表明，①尽管计划免疫已实施多年，发病年龄仍以6～15岁儿童为多，但i6岁以上及成人 发病比例明显增多(占42．7％)。②病情轻、不典型麻疹发病年龄较小，表明了幼年接种的作用，但同 时表明，对该年龄组(6一12岁)如不复种．则可能为麻疹患者。③典型麻疹以青年成人为多(占 85．9％)，而余下的14．1％则多为5岁以下幼儿，提示，青年成人幼年接种所产生的抗体已衰减殆尽； 而5岁以下幼儿接种时间尚短，如未失败尚有保护作用．更不会出现典型麻疹，故这些患儿可能当初接 种失败。④患者的病情轻重直接与其体内抗一MVI酊水平有关。本资料证实，抗体水平在1：300阳性 时只发生轻型典型或非典型麻疹；1：800阳性者则仅可出现轻微表现的轻型非典型麻疹；而≤l：200阳 性者，则几乎100％为较重的典型麻疹；据此，通过患者的临床表现亦可推断其体内抗体的水平。本资 料还表明，在目前，计划免疫实施前的典型麻疹只占整个麻疹发病数的32．6％，即大多数患者症状较 轻，甚至无明显麻疹症状(但其仍具传染性)，给诊断和处理带来困难。 根据本资料所表明的不同年龄组患者的免疫状况而应采取相应的预防策略，如对学龄前儿童，应于 复种；对大龄儿童及成人则应强化免疫，尤其对婚前检查者应将接种MV列人计划项目；对≥26岁的幼 年患过麻疹且未接种未接触过麻疹者亦应接种。对学校、部队等集体单位的新成员应予接种；需对我国 青年成人的麻疹易感性作一调查并采取相应措施以控制和消除麻疹。此外，计划免疫实施者对注射疫苗 的注意事项及方法应严格准确掌握，尽可能避免和减少免疫失败。本资料中部分患者于1月前接种过麻 疹疫苗，可以肯定此次免疫未成功。此外，应考虑建立个人免疫接种卡，随本人身份证等一并保存和随 人流动。 A4．结核分支杆菌katG基因突变与其耐异烟肼机制的研究 复旦大学附属华山医院传染科(20喊zs) 张文宏陈澍鹿茂银翁。华 异烟肼(Ⅱ岍)作为抗结核治疗的首选药物，对结核病的有效控制发挥了重要作用。但近年来结核分 支杆菌对riCH耐药性以及多重耐药的出现已成为抗结核治疗中的重大障碍。研究表明，咖实际上是一 个药物前体，需经结核分支杆菌过氧化氢酶一过氧化物酶活化后才发挥抗结核作用．而过氧化氢酶一过氧 化物酶则由katG基因所编码。最新研究认为KatG基因的变异(包括点突变、缺失、插人等)导致的结核分 枝杆菌过氧化氢酶～过氧化物酶活性降低或缺失可以解释90％以上的INH耐药。近年来，研究发现：INH 耐药性结核分支杆菌中，KatG基因突变较其完全缺失更为普遍。而多数的文献都对在异烟肼耐药菌株的 (CTG)作了报道，认为这两个突变点是可以作为检测结核杆菌对异烟彤f耐药的简易指标。但有多篇文献 也对此提出异议。因此，仅仅通过临床流行病学研究还不能对此作出肯定性回答，对临床耐药菌株中筛选 到的突变点进行机制研究与直接的评估才能最终明确变变点与耐药的直接关系。 本课题在国内率先采用定点诱变技术在野生型标准株的katG基因中获得$315T标准突变体，即 功能上的区别，从而直接对该突变点在耐药机制中的意义作出论证，为今后评估突变点与结核杆菌耐药性 间的直接关系奠定基础。 材料与方法 ‘ (一)材料：结核分支杆菌野生型H37Rv株，美国FDA分支杆菌实验室李忠明博士提供；大肠杆菌 李忠明博士提供PWO DNA聚台酶，购自罗氏公司；DNA内切酶，购自罗氏公司；T4DNA连接酶；购自罗氏 盒．购自德国QIAGENE公司； (--)方法 1．PCR定向诱变与重组。应用PC c (nt943～945)附近的单一酶切位点(Agd)进行酶切，酶切后进行PR定向诱变与重组。 1．1定向诱变 1．1．1定蔚诱变设计 单一酶切位点 922 A霉eI l943—945 5’l KatG基因 AGC l 3’