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曼塑堕竺!竺!●D 分子前沿技术 在传染病诊断中的应用 T．Briese，w．I．Lipkin(美国哥伦比亚大学) 摘要：分子检测方面的最新研究显示，直接检测临床样本中的微生物核酸能够为诊断提 供快速、敏感和多重检测方法。其中，最引人注目的是MaSsTagPcR、GreeneChip、非偏离高通 量焦磷酸测序(uHTS)技术，在一些病原分离和培养条件比较苛刻病例中获得成功应用。当怀 疑某个特定病原时，可以运用MassTagPCR进行样品筛选。Greenechip通常是用于初筛失败 或检测的痛原超出MassTagPCR检测范围。当怀疑有新病原而Greenechip并不能检测出候 选病原时，就需要采用UHTS技术。本文综述了这些分子前沿技术在传染病诊断中的应用。 关键词：微生物核酸；检测技术；MassTagPCR；GreeneChip；UHTS 作者简介： T．Briese博士，美国哥伦比亚大学梅尔曼公共卫生学院临床流行病学 副教授，传染病与免疫学中心副主任。1987年获德国柏林佛里尔大学博士 学位。2(J02年至今在哥伦比亚大学任教。主要从事慢性、急性和神经精神 病学方面的传染病原因子的分子生物学研究。具体包括：新发病毒疾病的 分子流行病学、病毒一宿主细胞互作以及病原诊断和创新型诊断方法开 发。目前主攻潜在生物威胁的快速诊断分子学工具开发。 在医药公共卫生领域，传染病的不同诊断方法 用一个阶段性的病原鉴定和发现策略建立了可实 越来越受到重视。如果能快速地鉴定出特异性病 现成本、范围和敏感性互补的检测平台：①MasSTag 原，就可以通过靶向药物治疗大大降低发病率和死 pcR能够在一次试验中检测30种病原因子； 亡率。通常综合病征并不是由单一病原所致，尤其 (④Greenechip微阵列可广泛针对已知的病毒、细 是在疾病感染早期，因此，诊断时需要同时考虑多 菌．真菌以及寄生虫进行检测；⑧非偏离高通量焦 种因素。随着日益增加的闷际运输和贸易，新出现 磷酸测序(uHTS)技术可以用于研究宏基因组， 的人兽共患病病原会有更多机会持续并迅速传播 也町以通过整体生命树发现真正的病原体。当怀 PcR进行 至世界各地。近期在分子检测方面的研究显示，直 疑某个特定病原时，可以运用MassTag 接检测临床样本中的微生物核酸能够为诊断提供 样品筛选。GreeneChip分析技术通常足用于初筛 快速、敏感和多苇检测方法。这种方法在一些病原 失败或检测的病原超出MassTagPcR检测范围。 分离和培养条件比较苛刻病例中获得成功应用。 当怀疑有新病原而Greenecmp并不能检测出候 在哥伦比亚大学传染病与免疫学中心，我们运 选病原时，就需要采用UHTS技术。假如 收稿日期：2009—12—31 MassTag 万方数据 蕊打mPDu如可l，oLjl2，胁．3．2D』D 鱼塑塑竺兰竺竺L一●固宙◆ 鉴定就可以通过在群范围内的测序特性、特定靶 克服这些局限。采用大气压化学电离(APCI)可对 向诊断试验来确定(见图1)。 离子化和图像分离质子标签进行广泛地检测，并 临床样本 且整合Ms和PcR用于单核苷酸多态性(SNP) 分析和DNA测序中，这样就