植物蛋白相互作用的研究方法.pdfVIP

贵州农业科学 2014，42(5)：34~37 GuizhouAgriculturalSciences [文章编号]1001—3601(2014)05—0253—0034—04 植物蛋白相互作用的研究方法 周 峰 (南京晓庄学院 生物化工与环境工程学院，江苏 南京 21l171) [摘 要]蛋 白的相互作用是生命科学研究中的一个重要领域，对于研究未知蛋 白的功能与作用具有重 要意义 ，是 目前研究的热点领域。文章介绍了非 目标蛋白及 目标蛋 白相互作用的研究方法，讨论 了这些研究 方法在植物蛋 白相互作用上的应用，并展望了研究蛋 白相互作用的前景 。 [关键词]植物蛋 白；相互作用；分裂泛素化；酵母双杂交；蛋 白质芯片 [中图分类号]Q943．2 [文献标识码]A ResearchMethodsofPlantProtein Interaction ZHOU Feng (SchoolofBiochemicalandEnvironmentalEngineering，NanjingXiaozhuangUniversity，Nanjing，Jiangsu211171，China) Abstract：Proteininteraction isoneoftheimportantfieldsin lifescienceresearch．Itisofsignificant meaningforresearchofthefunctionofunknownprotein．Therefore，itisaresearchhotspotrecently．The researchmethodofinteractionsofuntargetedproteinandtargetedproteinwereintroducedinthispaper．It wasdiscussedthattheapplicationandcharacteristicofthesemethodsinplantproteininteractionspresent， theresearchprospectwasproposedaswel1． Keywords：plantprotein；interaction；yeasttwo—hybrid；splitubiquitin；proteinarrays 蛋白的相互作用是生命科学研究的一个重要领 1 非 目标蛋白相互作用的研究方法 域，它对于研究未知蛋 白的功能与作用具有重要意 义。蛋 白按研究对象可分为非 目标蛋 白及 目标蛋 1．1 酵母异源表达法 白。 目前，越来越多的高等植物基因组序列已被测 酵母异源表达法与转录组学和基因组学不 同， 定出，但很多基因的功能 尚不明确 。过去 10年里 ， 蛋白的相互作用研究需要通过克隆的蛋 白开放阅读 基因组学的很多方法应用到蛋 白质的功能研究中， 框 (openreadingframe，ORF)表达，依赖重组克隆 但蛋白质往往都在复合体 中整体发挥作用 。因此 ， 的高通量方法可同时对大规模 的蛋 白质克隆，适用 忽略蛋 白之间的结构和功能联系 ，很难全面 了解蛋 于蛋 白相互作用的高通量研究。酵母异源表达有很 白质的功能。另外 ，通过对未知蛋 白与 已知功能蛋 多优点，比如低廉的操作费用，低 DNA 需求量转化 白的相互作用研究 ，可了解前者 的功能与作用 。近 等 。它应用最 多 的是酵母双杂交 (yeasttwo—hy— 几年 ，通过大规模的植物蛋白相互作用研究 ，阐明了 brid，Y2H)技术 和分 裂 泛 素 (splitubiquitin， 植物蛋白作用的复杂 网络系统。其 中，分裂泛素化 sUbq)系统。 酵母双杂交和蛋白复合物亲和纯化后的质谱分析是 1．1．1 Y2H Y2H 已