2015高考生物第1讲《基因工程)》ppt复习课件.ppt

(1)一个图1所示的质粒分子经Sma Ⅰ切割前后，分别含有________个游离的磷酸基团。 (2)若对图中质粒进行改造，插入的Sam Ⅰ酶切位点越多，质粒的热稳定性越________。 (3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Sma Ⅰ切割，原因是________。 (4)与只使用EcoR Ⅰ相比较，使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止____________________。 (5)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入________酶。 (6)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了____________________________________。 (7)为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在________的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。 【解析】　环状DNA分子中磷酸全部参与形成磷酸二酯键，被Sma Ⅰ限制酶切开后相当于一个正常的DNA分子，每个DNA分子单链各含有一个游离的磷酸基团；A－T碱基对有两个氢键，而G－C碱基对有三个氢键，G－C碱基对含量越多，热稳定性越高；从图中读出：Sma Ⅰ限制酶破坏目的基因和标记基因；用Bam HⅠ和Hind Ⅲ两种不同的限制酶处理，形成不同的黏性末端，能有效防止只用一种限制酶形成的相同的黏性末端的质粒或目的基因相互连接、环状化；将质粒与目的基因“缝合”应用DNA连接酶进行处理；标记基因的作用在于鉴别和筛选含有目的基因的细胞； 大肠杆菌突变体丧失吸收蔗糖的能力，不能在只有蔗糖为碳源的选择培养基上存活，所以可以用该种选择培养基对导入的蔗糖转运蛋白基因是否表达进行初步检测。 【答案】　(1)0、2　(2)高 (3)Sam Ⅰ会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因 (4)质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化 (5)DNA连接　(6)鉴别和筛选含有目的基因的细胞 (7)蔗糖为唯一含碳营养物质 * 第 1 讲　基因工程 1．与DNA有关的酶 (1)四种酶的比较 考点一： 基因工程的工具 高频考点突破 比较项目 限制酶 DNA连接酶 DNA聚合酶 解旋酶 作用底物 DNA分子 DNA分子片段 脱氧核苷酸 DNA分子 作用部位 磷酸二 酯键 磷酸二酯键 磷酸二酯键 碱基对间的氢键 形成产物 黏性末端或平末端 形成重组 DNA分子 新的DNA 分子 形成单链DNA (2)限制酶和DNA连接酶之间的关系图示 2．载体 (1)作为载体的条件 ①能在宿主细胞中稳定保存并大量复制。 ②有一个至多个限制性核酸内切酶切割位点，以便与外源基因连接。 ③具有特殊的标记基因，便于筛选。 (2)种类 ①质粒：一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。 ②λ噬菌体的衍生物。 ③动植物病毒。 (3)作用 ①作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞内； ②利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。 【特别提醒】 (1)DNA连接酶起作用时不需要模板。 (2)限制酶在使用时的注意事项： ①切割目的基因和载体时，最好用同一种限制酶，以产生相同的黏性末端。 ②在切割含目的基因的DNA分子时，需用限制酶切割两次此DNA分子，产生4个末端。只有这样，目的基因两端都有可连接的黏性末端或平末端。 ③限制酶切割位点应位于标记基因之外，不能破坏标记基因，以便于进行检测。 【对位训练】 1．(2012·江苏南通二模)某DNA分子中含有某限制酶的一个识别序列，用该限制酶切割该DNA分子，可能形成的两个DNA片段是(多选) 解析　由于DNA的两条链反向平行，因此读碱基序列时，上面一条链从左向右读的话，则下面一条链从右向左读；同一个限制酶切割产生的末端存在相同且互补序列。A选项中两个黏性末端的碱基序列不相同也不互补，不是同种限制酶切割产生的；B选项中两个平末端的碱基序列若连接起来：上面是GGAT，下面是ATCC，碱基序列也不同，不是同种限制酶切割产生的。 答案　CD 2．(2011·杭州学军中学期中)下图表示一项重要的生物技术，对图中物质a、b、c、d的描述，正确的是 A．a的基本骨架是磷酸和核糖交替连接而成的结构 B．要获得相同的黏性末端，可以用相同的b去切割a和d C．c连接双链间的氢键，使黏性末端处碱基互补配对 D．若要获得未知序列的d，可到基因库中去寻找 解析　a是载体质粒，b限制酶切割质粒，c是DNA连接酶连接质粒和目的基因，d是目的基因。质粒是环状DNA，其基本骨架是磷酸和脱氧核糖交替连接而成的。要想获得同一种黏性末端只能用同一种限制酶。DNA连接酶连接的是磷酸和脱氧核糖之间的键，