植物组织培养综合实验1.pptVIP

植物组织培养综合实验1 花卉离体快繁与工厂化育苗技术 实验目的意义 通过满天星等的茎尖培养获得完整的幼苗，学会茎尖组培快繁的基本原理和操作技术。 实验原理 植物的茎尖和腋芽在适宜的培养基上，在合适的激素条件下，其生长点分化形成大量芽并能形成良好的苗。苗经诱导可长出根而形成完整的植株，这就是茎尖组培快繁。此技术已广泛用来繁育那些不能形成种子进行繁殖或难以繁育的花卉杂交品种或其它具有重要经济价值的植物，由于病毒一般不侵入生长点细胞，因此，这种方法也广泛用来脱病毒获取脱毒苗。 理论基础 利用离体培养技术，将来自优良植株的茎尖、腋芽、叶片、鳞片等器官、组织和细胞进行离体培养。在短期内获得大量遗传性一致的个体的方法（技术）称离体无性繁殖，由于这种方式得到的植株群体来自一个单株（或一个单芽），它们的遗传组成相同，这些株群可称单株无性系或单芽无性系。 优越性： 繁殖速率快；育苗工厂化 植物组织培养的培养基 一、培养基组成 1、无机营养 包括大量元素和微量元素。 2、有机营养 包括维生素类、氨基酸类、能源及渗透压调节剂等。这些物质一方面做氮源，一方面有利于生长。 3、激素及植物生长调节剂 促进细胞脱分化和再分化 4、附加物类：固化剂（一般用琼脂和卡拉胶）、有机添加物（如椰乳、香蕉泥、马铃薯、酵母提取液等）、活性炭等。 生长素的生理作用1、促进细胞生长和细胞分裂2、诱导受伤组织表面细胞恢复分裂能力3、形成愈伤组织，促进生根4、与一定量的细胞分裂素配合共同诱导不定芽的分化、侧芽的萌发与生长、胚状体的诱导。 ２、微量元素母液的配制MS培养基的微量元素无机盐由7种化合物（除Fe）组成。微量元素用量较少，特别是?CuSO4·5H2O、?CoCl2·6H2O?，因此在配制中分微量Ⅰ、Ⅱ配制。按照表2，表3配方，用感量为0.0001g的分析天平称量，其它同大量元素。配制培养基时，每配制1L培养基，取微量Ⅰ10ml，微量Ⅱ１ml 4、有机母液的配制MS培养基的有机成分有甘氨酸、肌醇、烟酸、盐酸硫胺素和盐酸吡哆素。培养基中的有机成分原则上应分别单独配制。配制直接用蒸馏水溶解，注意称量时用电子分析天平。并贮存在棕色无菌瓶中 。配制生物素、叶酸，用稀氨水溶解，然后定容。 本周实验内容 植物离体快繁——初代培养 1 培养基的配制 2 外植体的采集及灭菌处理 3 接种与无菌操作 4 培养物观察 初代培养 实验材料： 满天星或非洲菊带茎尖的苗 75%乙醇溶液和0.1%升汞溶液 需灭菌物品： 诱导培养基:MS＋6-BA 1.0mg/L（Ph5.8） 培养皿、吸水纸、解剖刀、长柄镊子等 实验操作 1、培养基的配制及实验器材准备 培养基： MS＋6-BA 1.0mg/L+3%蔗糖（Ph5.8） 实验器材： 吸水纸，操作盘（饭盒或培养皿）；镊子；剪刀；酒精棉球等。 超净工作台准备： 2、植物无菌培养物的获得 从田间获得的满天星枝条或幼苗，切取茎顶或带腋芽的茎段，用水反复冲洗，切取茎尖（2cm）或带腋芽的茎段，用70%乙醇溶液浸15秒，再用0.1%升汞溶液灭菌8～10分钟，用无菌水清洗几次，在无菌操作台上或接种箱中，逐层剥去外面的大叶，切取只有2～3个小叶的茎尖（0.5cm大小），接种于诱导培养基上，置于25℃的恒温下照光培养。 选材：材料类型、大小，年龄与发育状况等 修剪：去除较老和脏的叶片，尽量减小体积，减少污染 清洗：自来水冲洗，2％洗涤剂浸泡20分钟，清水冲洗（注意材料损伤） 实验结果与分析 培养过程请进行下列观察和记录 1、污染情况：内生菌污染？外源菌污染？ 2、茎尖诱导情况，分枝状况，诱导率。 3、幼苗生长状况：弱小？健壮？玻璃化？褐化？ 学习与思考 1、切取的用于接种的茎尖大小对诱导率有影响吗？为什么？如何根据实际情况进行外植体的切取？ 2、茎尖培养在实际生产中有哪些用途？ 3、观察实际结果并分析原因。 植物组织培养设备及无菌操作技术 一、设备 灭菌设备，接种室，超净工作台，接种工具，培养室及培养设备，练苗室，次生代谢产物分离、纯化、提取设备。 二、无菌操作技术 1、各种灭菌方法及其使用范围 干热灭菌 玻璃器皿、器械 湿热灭菌 培养基、蒸馏水、器械、棉塞、包头纸 熏蒸灭菌 接种室、培养室 过滤灭菌 液体培养基、蒸馏水 药剂灭菌 培养材料 烧灼灭菌 器械、瓶口、棉塞、包头纸 辐射灭菌 接种室。培养间 常用消毒剂及其特点 对消毒剂的要求是：既有良好消毒作用，又易冲洗或自行分解，不 损伤材料，不影响生长。 消毒剂 使用浓度（%） 去除难