高压氧暴露大鼠肺组织内PPAR通路分子变化规律.pdfVIP

高压氧暴露大鼠肺组织内PPAR通路分子变化规律 攸璞，姚健，包晓晨，马骏，张师，方以群 氧中毒是由于呼吸了高氧分压气体后产生的一种有害反应。肺脏即为其中的主要靶器官 之一。大鼠受到高压氧持续作用后可见肺脏形态学改变，肺水肿、充血和肺泡内出血。 PPAR是核激素受体超家族的成员，是最早发现于降血脂药物氯贝丁酯服用后肝脏实质 细胞内发现的，具备介导过氧化物酶体增殖作用的分子。对其进一步的研究表面，该家族分 子参与了多个生物过程的基因表达调控，包括脂代谢和胰岛素敏感性。目前已知的PPAR同 与视黄醇类X受体以异二聚体形式存在，并且受到一些协同抑制分子的作用而抑制了其活 性。只有在PPAR配体出现的时候，使得以上协同抑制分子解离，紧接着在协同激活分子参 与的情况下结合到特异的PPAR反应元件上从而转录目标基因。已经发现的PPAR参与生物过 程有，脂肪细胞的分化、糖和脂的代谢、各种白细胞(如单核／巨嗜细胞、淋巴细胞和树突 状细胞等)中均在免疫反应过程中发生表达升高。特别的，在炎症反应过程中jPPAR扮演 着重要的抗炎角色，大量研究显示该类分子有抑制促炎因子的释放的作用，这些促炎因子包 括细胞因子(如白介素1和6、肿瘤坏死因子a等)，一氧化氮和机制金属蛋白酶等的释放。 而其中的机制，可能是部分通过抑制NF-kb、AP和Statl来实现的。 在PPAR相关的治疗炎症反应的尝试中，有大量实验使用了PPAR配体(常见的有PGZ， TGZ，PGJ2和RGZ等)用来治疗脑、肺脏、胃肠道和肾脏等组织器官的缺血／再灌注损伤模 型中，这些配体主要表现为一种抗炎症和抑增殖作用，尤其是PPAR—Y的配体可以抑制原炎 症基因的表达，比如TNF_Q，IL-I 器官的缺血／再灌注损伤的目的。既然PPAR通路在炎症过程中发挥着重要的调控作用，因此 本实验旨在研究常见PPAR通路中的各分子在肺型氧中毒模型中的表达变化规律，为进一步 治疗肺型氧中毒提供新的靶标。 I材料和方法 1．1仪器与材料成年雄性SD大鼠(上海市中国科学院动物中心，体重260～2809)，动物高 0 压氧舱(上海7 1研究所杨园医用氧舱厂)，医用氧气(上海市江南气体公司)，钠石灰 (上海五四化工厂)。 1-2动物分组12只SD大鼠随机分为4组，每组3只用于芯片检测：1组为常压空气组，2组 为高压氧2h组，3组为高压氧4h组，4组为高压氧6h组。15只SD大鼠随机分为5组， h组， 3组 每组各3只用于病理分析与RT-PCR检测：1组为常压空气组，2组为高压氧2 MPa， 为高压氧4h组，4组为高压氧6h组，5组为高压氧8h组。高压氧暴露方案为0．25 h、8h。 持续2h、4h、6 kg)，动物进舱后，纯氧洗 1．3肺型氧中毒模型的制备动物进舱前舱内预先放置钠石灰(2 舱5min，使舱内02浓度99％，以0．1MPa／min的速率加压至0．23MPa，持续微量通风， 维持舱内02浓度99％。暴露相应时间后，动物出舱，进行指标测定。 作者单位：200433上海，海军医学研究所 360 1 4肺组织病理学检查动物处死后．取右肺下叶，用10％福尔马林固定．石蜡包埋，切片． 1{E染色。染色后用显微镜观察拍照其病理改变。 1 h、4h和6h组 5大鼠oligo芯片检洲氧中毒时间序列表达谱从正常组、高压氧暴露2 各3只太鼠分离得到的左肺下叶，用TRIZOL试荆提取总RNA，经DNA酶处理去除基因蛆后 k全基因组芯片)。 送公司检测(大鼠40 1 6 h、4h、6h和8 P,T—PCR检洲从正常组、高压氧暴露2 h组各3只大鼠分离得到的左 肺下叶，用TRIZOL试剂提取总RNA，经DN^酶处理去除基因组后经删Lv逆转录合成获得第 一链cDNA，再经PPAR—q，PPAR一6和PPAttY特异引物检测。 2