双氢青蒿素软膏的研制与其对伯氏疟原虫的抗疟试验研究.pdfVIP

双氢青蒿素软膏的研制及其对伯氏疟原虫的抗疟试验研究 高晓新，董伟，巩文车，杜丰 中药复方新药开发国家工程研究中心 临床发作．但其脂溶性较大，吸收快，复燃率高．本研究对DHA体外透皮试验方法学进行研究，并制备出 DHA软膏荆以伯氏鼠疟原虫红细胞内期感染小鼠为模型，观察双氢青蒿素软膏剂的抗疟作用．为其经皮给 药系统制剂的研究提供参考。 I关键词l伯氏疟原虫双氢青蒿素透皮给药系统促渗剂软膏抗疟作用 l材料 1．1药品及试剂 庆华立武陵山制药有限公司，批号，水为高纯水，甲醇及乙腈为色谱纯，其他试 剂均为分析纯。 1．2虫株 NKl73株伯氏疟原虫(Plasmodiumber曲eiNKl73)。由军事医学科学院微生物流行病研究 所提供。 1．3仪器 型透皮扩散试验仪(上海锴凯科技贸易有限公司)，ABl35．S电子天平(瑞士梅特勒)。 1．4动物 昆明种小鼠，雄性，体重20～229，中国医学科学院实验动物研究所提供。 2．方法 2．1接收液中DHA的HPLC分析方法 Iml／min；检测波长：216rim；柱温：25℃。在该色谱条件下DHA与其他成分能达到基线分 离。精密称定DHA对照品10．13rag，置10ml量瓶中，加适量甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀， 即得对照品贮备液(1．013mg·ml‘1)。取DHA样品涂于已处理好的大鼠皮肤上，做体外透皮 试验，接收液经0．451am微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。另取不含DHA阴性对照样品， 同上操作，即得阴性对照溶液。精密吸取对照品贮备液，用接收液定容，配制一系列不同浓 159 度的溶液(O．025325、0．05065、O．1013、0．2026，0．4052、0．75975、1．013 mg·mld)，测定建 立标准曲线。同时进行精密度、回收率和稳定性试验的测定。 2．2不同处方软膏体外透皮试验 2．2．1软膏的制备 将由卡波普等组成的水溶性软膏基质、由泊洛萨姆等组成的水溶性软膏基质、由凡士林 等组成的油溶性软膏基质、由十二烷基硫酸钠作为乳化剂等组成的O／W型乳膏基质、由司 盘-80作为乳化剂等组成的W／O型乳膏基质，分别与一定促渗剂和DHA原料药混合均匀， 使得软膏中DHA含量为10％。 2．2．2离体皮肤的制备 用电动剃毛器将大鼠腹部毛剃光后，拉颈处死，去除皮下脂肪、筋膜、血管，用生理盐水 洗涤后，置．4C冰箱中保存备用。实验前自然解冻。 2．2．3渗透扩散试验 接收液20％乙醇生理氯化钠溶液；接收液体秋约为6ml：释放面积约为2．92cm2。将皮肤平 整置于扩散池的结合部，角质层面向供给池，将DHA样品涂在大鼠皮肤角质层上，在设定的 时间取样，全部取出接收液，每次取样后重新注满接收液，并排除接收室中的气泡。以单位 面积DHA累积透过量处理回归Higuchi方程并计算透皮速率J。 2．3软膏透皮促渗剂的筛选 以卡波普水溶性软膏为DHA处方基质，加入一定促渗剂，制成软膏。进行体外透皮试 验，分别于3、6、9、12、24h取样，HPLC检测，测定DHA峰面积，计算单位面积DHA 累积透过量，并作体外透皮释放曲线图及对曲线进行直线回归。 2．4对伯氏疟原虫的抗疟实验 2．4．1剂量设置 DHA软膏设3组，分别为70mg／kg、35mg／kg、17．5mg／kg。 2．4．2动物分组 接种疟原虫后按体重随机分5组，分别为模型组，DHAl00mg／kg口服组，DHA软膏 70mg／kg、35mg／kg、17．5mg／kg组。 2．4．3实验方法 用硫化钠脱毛剂在小鼠背部脱毛，脱毛面积为2x2mn2。脱毛后无菌接种疟原虫，采用 Peters法，接种1000万个感染鼠疟原虫的红细胞，接种量0．2mL／只。接种当日，DHA软膏 各组背部涂药，DHA口服组灌胃给药，连续给药4天，接种后第5天尾巴取血涂制薄血膜， 甲醇固定，吉姆萨染色后镜检原虫，求出每组动物的疟原虫平均感染率，与模型组平均感染 率比较，求出各组小鼠红细胞感染抑制率。如转阴，则观察1月内疟原虫复燃情况。镜检 50个视野查不见原虫为阴性。 感染抑制率=蔓堕塑塑坠蓑蓥差菁磊鎏霎纂学×t。。％ 3结果 3．1 且样品在24h稳定，以DHA含羞计算，RSD为O．95％。 3