猪miR-34c生物学功能的初步的研究.pdfVIP

1 ANIMALBIOTECHNOLOGYBULLETIN 97 2012，VOLUMEl3，NO 猪miR一34c生物学功能的初步研究 徐源，孙铁成，乔栖梧，李加琪’ (华南农业大学动物科学学院，广州，510642) 引言 以黄体期、卵泡期母猪卵巢和功能早衰卵巢差异表达miR一34e为研究对象． MUT)，将miR一34c与载体共同转染293T细胞(Sensor Reporter实验)．检测报告 期、卵泡期母猪卵巢和功能早衰卵巢显著差异表达，推测mtR一34e可能参与了卵 巢功能调节。为了深入研究miR一34e的生物学功能，本研究拟通过生物信息学预 34e生物学功能研究奠定基础。 测和实验证n)]miR34c的靶基因，为miR 材料与方法 将包含有miR MUT；随后选用GV慢病毒载体系列、pHelperl0载体和pHelper2．0载体三种质粒 34c慢病毒载体。分别将miR一34c慢病毒载体与野 组成的慢病毒载体系统构建miR 生型、突变性载体共转染293T细胞中．采用双荧光素酶报告基因检测系统检测报 告基因的表达水平。 结果 MUT)的两个对照组中(PO05)，miRNA不能通过结合空载体或突变体改变其 荧光活性：而实验组与两对照组均差异显著．miR-34c能通过结合Fox03a的 点．miR一34c可通过该结合位点影响报告基因的活性，Fox03a基因转录后可能受 miR 34c调控，不过还需要在特定组织中检测蛋白表达水平．最终确定miR一34e调 控Fox03a基因。 图lmiR一34c靶向Fox03双荧光检测 讨论 前体研究表明miR34c在黄体期、卵泡期及功能早衰卵巢表达差异显著，提 示可能在卵泡发育过程中具有重要作用。在人、小鼠中的很多研究中已表明 证miR 控机制研究提供参考资料。 关键词猪：卵巢：miR一34c；Fox03a 致谢：现代农业产、世体系专项(CARS一36) 轰薹熊：餐。釜9嚣未，：，?’雾镶‰勰‘‰荔鎏翟辫。％篇；g要瑟尝訾≥嚣。。。。。。