结核分枝杆菌CsdA的原核表达与免疫性分析.pdfVIP

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集 结核分枝杆菌CsdA的原核表达及免疫性分析 王华南-，亓英芳t，杜艳芬1，刘慧芳1，司微1，于申业1，倪洪波1，王春来1，刘思国r， 王加明2，杨 盛2，李素兰2，冯拥军2 (1．中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／动物细菌病研究室，黑龙江哈尔滨150001； 2．新疆生产建设兵团农十师畜牧兽医站。新疆维吾尔自治区阿勒泰市836000) kIl的重组蛋白。Westernblot分析表明，表达产物能够被鼠抗CsdA BL21(DE3)，在IPTG诱导下获得大小约为64 血清所识别，具有良好的免疫原性。本研究为进一步研究结核分枝杆茵(MTB)CsdA的结构和功能奠定了基础。 关键词：结核分枝杆菌；CsdA；原核表迭 tuberculosis)是有结核分枝杆菌 牛结核病(Bovine 1材料和方法 bovine)和牛结核分枝杆菌(Mycobae- (Myeobacterium terium tubercu- 1。1菌种结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)所引起的一种慢性消耗性的人畜 共患病【1】。该病传播速度快、范围广，对养殖业和 losis)H37Rv菌株购于中国生物制品检定所。 DH5tx和 人类的健康造成严重的危害。冷休克蛋白与热休克 1．2载体及宿主pET．28a宿主菌E．coli 蛋白一样是RNA分子伴侣与细胞中的mRNA结合，E．co／／BL21(DE3)感受态细胞均由本实验室保存。 DNA 稳定mRNA，调节蛋白质的表达㈣。对冷休克蛋白1．3主要试剂Taqpolymerase和限制性内切 的研究有助于揭示结核分枝杆菌的生长和繁殖规 酶购自MBI公司。DNA胶回收试剂盒、DAB购自 律，为在分子水平上进一步防制结核病提供理论依 His Pu． Bind 据。 宝生物工程(大连)有限公司。Ni-NTA rification CspA是CSP家族中的主要成员，也是被最先发 现而又研究得最为充分，而CSP家族中的其他成员 山羊抗鼠酶标二抗购自sigma公司。 研究的较少，可能的原因是相对CSPA而言，其他1．4结核分枝杆菌基因组DNA的提取参照文献 成员在细胞内的相对含量较低。CsdA在常温下表达 【8】中提取基因组的方法进行。 量极低，而在低温时会大量表达，并且是RNA解 1．5 PCR引物的设计及目的基因的扩增根据 旋活性核糖体结核蛋白，其功能与细胞的分裂增殖 有关【71。 南京金思特科技有限公司合成，其序列如下： CsdA在翻译水平上对细胞的生长进行调控，因 此本研究对结核分枝杆菌CsdA基因进行了克隆和 高效表达和免疫活性分析，进而为揭示结核分枝杆 GGCCTTCCCGGAAT-3’。 菌CsdA结构和功能奠定基础，同时也可能为结核 以结核分枝杆菌基因组DNA为模板，用Taq 病的治疗提供新的药物靶点。 DNA PCR扩增才CsdA基因。反应体系