植物内生细菌与其研究方法.pdfVIP

思茅松毛虫肠道细菌的初步研究 王金华a张武先b*孙佑赫c 西南林业大学，云南昆明，650224 摘要：思茅松毛虫 （Dendrolimukikuchii）在我国分布广，种群数量大，在云南普洱地区猖 狂危害思茅松、云南松等重要经济林木。本实验采用传统的稀释涂布培养法从思茅松毛虫1～7 七个龄期的幼虫肠道内分离纯化获得66株好氧细菌，分别对其培养性状、菌体形态、染色反应 和生理生化特性等进行了系统的研究；利用16SrDNA-RFLP技术对所得菌株进行多样性分析， 获得24个不同OTUs;选取各OTUs的典型代表菌株进行16SrRNA基因序列测定，结果得到 以约克氏菌属 （Yokenella）、芽孢杆菌属 （Bacillus）、肠杆菌属 （Enterobacter）、葡萄球菌属 （Staphylococcus）、克雷伯氏菌属(Klebsiella)等为主的肠道细菌24种，系统发育地位上分属 13个菌群。 关键词：思茅松毛虫；肠道细菌；16SrDNA-RFLP；序列分析；酶 植物内生细菌及其研究方法 王瑫1，2李永l朱天辉2朴春根1* 1.中国林业科学研究院森林生态与保护研究所国家林业局森林保护学重点实验 室 北京 1000912.四川农业大学 四川雅安 625000 摘要：植物内生细菌是植物微生态系统中的重要组成部分，近年来，已成为微生物领域研 究的热点，其潜在的可开发利用价值越来越受重视。植物内生细菌的研究首先应该明确其植物 体内的内生细菌多样性，而内生细菌的多样性研究方法层出不穷，主要分为两类：基于传统手 段的分离培养法和基于分子生物学技术的非培养法，本文主要介绍了现阶段应用较多的研究方 法，并着重比较了这些方法的优势与局限，旨在为植物内生细菌更好的研究和利用提供基础。 关键词：植物内生细菌；培养法；非培养法；分子生物学技术 EndophyticBacteriaandthemethodsofresearching Abstract:EndophyticbacteriaistheimportantpartofthePlantsmieroecosystem.Ithasbecamea hotspotintheresearchingfieldofmicrobiologyrecently,andhasmademoreattentionbythepotential developingvalue.Thediversityofendophyticbacteriashouldbefirstlymadeclearwhenendophytic bacteriawerestudied,butstudiesmethodsaboutthediversityofendophyticbacteriawerequitea lot,whichweremainlydividedintotwocategories:culturingbasedonthetraditionalmeansof separationandnon-culturingbasedonmolecularbiologytechniques.Theresearchmethodsrecently weremainlydescribedinthepaperandtheirstrengthsandlimitationswerecompared,whichwere designedtoprovideabasisforbetterstudyandapplicationofendophyticbacteria. Keywords:Endophyticbacteria;culturingmethods;non-culturingmethods;molecularbiology techniques 1．2植物内生菌与潜伏侵染 目前，生长于植物体内的微生物群落主要以寄生、潜伏侵染和内生三种方式存在。潜伏侵 染是病原物入侵寄主州暂时不表现现症状，一直到植物生长后期，或有些器官成熟后，或者是 环境很适宜于发病时，症状才开始表现【6】。在潜伏侵染和内生定义之间存在一些交叉，容易导 致两者混淆。有些微生物对植物生长是否产生危害很难判断，从而导致很难界定其属于内生菌