嗜酸乳杆菌高密度培养工艺条件的优化及其评价.docVIP

嗜酸乳杆菌高密度培养工艺条件的优化及其评价 ［摘　要］目的：探讨嗜酸乳杆菌培养条件，研制出一种菌活性高、密度大、操作简便、易于生产应用的发酵工艺，阐明乳酸菌直投式发酵剂的生产和应用。方法：选取嗜酸乳杆菌中国株为菌种，根据培养基成分的配比不同，分为实验组和对照组，优化培养条件以及ＭＲＳ 液体培养基的配方，通过紫外分光光度计检测菌液的吸光度（Ａ６５０）值和活菌数量变化，筛选出最优的工艺过程。结果：通过筛选确定嗜酸乳杆菌的最佳培养条件是接种量１％，初始ｐＨ值６．２，３７℃恒温厌氧培养２３ｈ；最适培养基配方为３．５％蛋白胨、０．５％酵母提取物、２％葡萄糖、０．２％柠檬酸铵、０．０８８％磷 酸 氢 二 钠、０．６％乙 酸 钠、０．０２５％硫 酸 锰、０．０６％硫 酸 镁、１％营 养 因 子 和０．１％吐温８０；由最适培养工艺培养得到的菌种数可达１．４３×１０１１　ｃｆｕ·ｍＬ－１，较传统培养方案相比菌种数增长约１×１０１１　ｃｆｕ·ｍＬ－１，且工艺简便易行。结论：实现对嗜酸乳杆菌培养条件和培养基配方的优化，得到嗜酸乳杆菌最优培养工艺条件，菌种的高密度培养可用于乳酸菌直投式发酵剂的制备和应用。 ［关键词］嗜酸乳杆菌；高密度；培养条件；优化；工艺 ［　Ａ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｉｇｈ　ｄｅｎｓｉｔｙ ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｆ　Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ Ａｂｓｔｒａｃｔ ： Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ， ａｎｄ　ｔｏ　ｄｅｖｅｌｏｐ　ａ　ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ　ｈｉｇｈ　ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ ， ｂｉｇ　ｄｅｎｓｉｔｙ ， ｓｉｍｐｌｅ　ｏｐｅｒａｔｉｏｎ ， ｅａｓｙ　ｆｏｒ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ， ａｎｄ　ｔｏ　ｃｌａｒｉｆｙ　ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌａｃｔｉｃ　ａｃｉｄ　ｂａｃｔｅｒｉａ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ　ｓｔｒａｉｎ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｗｅｒｅ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ； ａｃｃｏｒｄｉｎｇ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｍｅｄｉｕｍ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ， ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ ｓｅｔ　ｕｐ ； ｔｈｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ａｎｄ　ｆｏｒｍｕｌａ　ｏｆ　ＭＲＳ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｗｅｒｅ　ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ， ａｎｄ　ｔｈｅ　Ａ ６５０ ｖａｌｕｅ　ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａ　ｌｉｑｕｉｄ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｌｉｖｅ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ＵＶ　ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ ， ａｎｄ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｗａｓ ｓｃｒｅｅｎｅｄ　ｏｕｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　 Ｔｈｒｏｕｇｈ　ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ　ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ； ｔｈｅ　ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ　ｑｕａｎｔｉｔｙ　ｗａｓ　１％ ， ｉｎｉｔｉａｌ　ｐＨ　ｖａｌｕｅ　ｗａｓ　６．２ ， ｔｈｅ　ｃｏｎｓｔａｎｔ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｗａｓ　３７ ℃ ａｎｄ ｔｈｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｔｉｍｅ　ｗａｓ　２３ｈ．．Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｆｏｒｍｕｌａ　ｗａｓ　ｐｅｐｔｏｎｅ　３．５％ ， ｙｅａｓｔ　ｅｘｔｒａｃｔ　０．５％ ， ２％ ｇｌｕｃｏｓｅ ， ０．２％ｃｉｔｒｉｃ　ａｃｉｄ　ａｍｍｏｎｉｕｍ ， ０．０８８％ ｓｏｄｉｕｍ　ｈｙｄｒｏｇｅｎ　ｐｈｏｓｐｈａｔｅ　ｔｗｏ ， ０．６％ ｓｏｄｉｕｍ　ａｃｅｔａｔｅ ， ０．０２５％ ｍａｎｇａｎｅｓｅ　ｓｕｌｆａｔｅ ， ｍａｇｎｅｓｉｕｍ　ｓｕｌｆａｔｅ　０．０６％ ， １％ ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒ ， ０．１％ Ｔｗａｉｎ　８０ ； ｔｈｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｗａｓ ｕｐ　ｔｏ　１．４３× １０ １１　 ｃｆｕ · ｍＬ －１　 ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｐｒｏｃｅｓｓ ； ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　ｔｒａｉｎｉｎｇ ｓｃｈｅｍｅ ， ｔｈｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｂａｃｔ