二、立论依据.doc

二、立论依据 (包括项目的研究意义、国内外研究现状分析，并附主要参考文献及出处。) 对基础研究,着重结合国际科学发展趋势,论述项目的科学意义； 对应用基础研究,着重结合学科前沿、围绕国民经济和社会发展中的重要科技问题,论述其应用前景 1. 电子信息杂交策略及其在猪基因组研究中的应用现状 电子信息杂交策略是依据比较基因组定位结果，充分利用猪EST（expressed sequence tag, EST）数据库的信息资源，借助计算机辅助进行基因的克隆，又称为“silicon cloning”。其基本原理是利用研究深入、标记稠密的哺乳动物基因组保守功能基因的编码区序列（CDS）作为信息探针，在猪EST数据库筛选同源EST(s)(标准：长度≥100bp，同源性75%～95%) ，排除已克隆EST(s)后进行拼接，设计引物获取基因(cDNA) 全长（Altschul 等，1990；Mao等，1998；A田芳等，2000；Cirera 等，2000）。该方法的特点是：（1）是建立在生物信息学分析的基础上，进行同源性比较和计算机辅助克隆新基因，具有快速、简便、直接等优点；(2) 因为该方法在选择候选基因时有很强的目的性，是一种与定位克隆、定位候选克隆策略并列的比较候选基因法；（3）由于该方法是利用的是EST即cDNA部分序列信息，因而能够获得基因(cDNA) 全长（Liang等，2000）。 利用电子信息杂交策略在分离猪基因中的应用才刚起步（Cirera 等，2000），但该方法在人及其它动物基因分离中已经有广泛的应用（Mao等，1998；Bolognese, 等，2000；毕安定等，2000；范玉新等，1999），由此可见，利用电子信息杂交策略分离猪基因将具有良好的应用前景，在国内开展十分必要。 2. 猪12号染色体上基因及遗传与物理的研究现状与不足 12号染色体是猪基因组中最小的中部着丝粒染色体，1999年2月22日申请者在网上检索到的猪12号染色体上遗传与物理图谱现状如图1、图2、图3。收录到猪12号染色体上的基因和标记共57个，其中功能基因26个，微卫星标记31个。功能基因有：ALOX12（二十碳四稀酸-12-脂氧合酶，arachidonate 12-lipoxygenase ）；CDC42（GTP结合蛋白，porcine EST, GTP binding protein）；EAD（红细胞抗原D，erythrocyte antigen D）；GH1（生长激素，growth hormone）；HOXB6（同源框B6，Homeobox gene B6）；NME1（Nm23 protein）；INHBB（抑制素β亚基，Inhibin, beta subunit）；KICT（细胞骨架角蛋白类型I，Keratin type I, cytoskeletal）；MCP（单核苷酸趋化蛋白，Monocyte chemoattractant protein ）；PRKAR1A（cAMP依赖性蛋白激酶调节亚单位类型1A ，cAMP-dependent protein kinase regulatory type1 alpha）；POLR2 (大多肽RNA聚合酶Ⅱ,large polypeptide RNA polymerase II)；TK1(可溶性胸苷激酶1,thymidine kinase 1, soluble)；TP53 (肿瘤蛋白53, tumour protein p53)；UMPH2 (尿苷酸磷酸水解酶2, uridine 5-monophosphate phosphohydrolase 2)； MAP2C（微管相关蛋白2，microtubule associated protein 2） ； ACACA（乙酰辅酶A羧化酶，acetyl-coA carboxylase）； MYH2 (肌球蛋白重链2，myosin heavy chain2)； GAS（胃泌素，gastrin）； PNMTP（苯基乙醇胺—N—甲基转移酶，phenylethanolamine N methyl transferase）； LPO（乳过氧化物酶，lactoperoxidase）； PAX8 ( 成对盒同源蛋白8， paired box homoprotein 8)； MYH1 (骨骼肌肌球蛋白重链，skeletal myosin heavy chain)； GRB2（生长因子受体结合蛋白2，growth factor receptor-bound protein 2）； D20238（human EST）； H01962（human EST）； Z94858（porcine EST b9）。微卫星标记有：S0083 ，S0090，S0096，S0106，S014