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AGAMOUS半定量同源性反义植物表达载体论文 【提示】本文仅提供摘要、关键词、篇名、目录等题录内容。为中国学术资源库知识代理，不涉版权。作者如有疑义，请联系版权单位或学校。 【摘要】百合（Lilium spp.）作为世界著名的五大切花之一，以其花朵硕大、色彩丰富、花姿优美且寓意百年好合而赢得世界人民的喜爱。但百合在生产实践仍有许多问题有待于进一步解决，如花型单一、花粉量大等。因此，如何创造出花型改良的百合新类型（如无花粉、重瓣等）一直是科学家们研究热点。本研究从3个品系7个百合品种中克隆出了14个花发育C类基因——AGAMOUS (AG)基因，并对其进行了组成及结构分析，并对其中2个品种的4个基因表达特性进行了研究，而且构建了AG基因的反义植物表达载体。主要结果如下：1.根据已报道的AG基因序列设计一对简并引物，通过RT-PCR方法，克隆得到14个花发育相关的C类基因，经比较新克隆基因与Genbank报道的AG基因有较高的同源性，并初步认定为百合花发育相关的C类基因。2.通过对新克隆的14个基因进行氨基酸序列及结构分析，发现所有序列除了具有非常保守的M区外，所有序列均含有AG I和AG II两个保守区（该特征是认定该基因属C类基因的最重要标准之一），进一步确定本研究所得到的14个基因均为与百合花发育相关的C类基因。3.运用RT-PCR半定量检测方法，对东方百合杂种系的Lilium hybrid cultivar Tiber和Lilium hybrid cultivar Siberia2个品种的AG基因时空表达情况进行了分析，发现该基因仅在花的雄蕊及雌蕊中表达，符合经典的花发育ABC模型理论；同时发现在同一部位的不同发育时期，AG基因的表达特性存在差异。4.通过对新克隆的AG基因以及同纲近缘物种的AG基因进行同源性比对和分析，发现新克隆的AG基因与Genbank中所登录的百合属植物AG基因之间同源性较高，达91%。5.根据测序结果及对载体结构的分析，重新合成一对特异引物，并在两端引入合适的酶切位点，以pBI121为基础构建了以花特异表达启动子驱动的反义植物表达载体pCLtAG1及pCLtAG2，为后期遗传转化奠定了基础。 【关键词】百合；AGAMOUS；半定量；同源性；反义植物表达载体； 【篇名】百合AGAMOUS同源基因的克隆、表达特性研究及载体构建 【目录】百合AGAMOUS同源基因的克隆、表达特性研究及载体构建 摘要 4-5 Abstract 5-6 1 前言 11-19 1.1 研究背景 11-12 1.2 百合育种目标 12-15 1.2.1 花色 12-13 1.2.2 花期 13 1.2.3 花香 13 1.2.4 抗性 13-14 1.2.5 保鲜及品质改良 14-15 1.2.5.1 保鲜 14 1.2.5.2 茎秆挺度 14-15 1.2.6 花粉 15 1.3 花型育种研究进展 15-18 1.4 研究的目的意义 18-19 2 东方百合杂种系 AG 基因克隆及序列分析 19-43 2.1 材料与试剂 19-20 2.1.1 材料 19 2.1.2 质粒及菌株 19 2.1.3 试剂 19 2.1.4 仪器 19-20 2.2 方法 20-26 2.2.1 东方百合Lilium hybrid cultivar Constanta AG基因的克隆 20-25 2.2.1.1 RNA 的提取 20 2.2.1.2 Constanta AG基因cDNA第一链的合成 20-21 2.2.1.3 Constanta AG基因的克隆 21-22 2.2.1.4 PCR产物的检测与回收纯化 22-23 2.2.1.5 PCR产物的连接 23 2.2.1.6 感受态细胞的制备 23 2.2.1.7 连接产物的转化 23-24 2.2.1.8 重组子的鉴定与保存 24-25 2.2.1.9 重组子的测序 25 2.2.2 东方百合Lilium hybrid cultivar Tiber AG基因的克隆 25 2.2.2.1 材料 25 2.2.2.2 方法 25 2.2.3 东方百合Lilium hybrid cultivar Siberia AG基因的克隆 25-26 2.2.3.1 材料 25 2.2.3.2 方法 25-26 2.3 结果与分析 26-43 2.3.1 东方百合Lilium hybrid cultivar Constanta AG基因克隆 26-31 2.3.1.1 东方百合Lilium hybrid cultivar Constanta 总 RNA电泳检测 26 2.3.1.2 PCR 扩增 Constanta AG 基因 26 2.3.1.3 重组子菌落 PCR 检测 26-27 2.3.1.4