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IL34 动态或在位生化分析方法发展 陈义+、刘国诠、余晓、齐莉、黄吴文、赵睿、韩惠婉、郭磊、戴东升 (中国科学院化学研究所分析与生命科学研究室／化学生物学联合实验室，北京100080) 随着生命科学研究的快速发展，传统的、通过处死动物或通过长时间平均的方法来 研究生命现象，已经出现极大的困难，难以继续为生命科学研究提供动力，甚或成为研 究发展的阻力。如何面对活生生的生命个体，发展新的研究策略和方法，实际上已经成 为认识生命本质的瓶颈。上一世纪末启动的基因组计划，因对分析方法的重要性估计不 足而修正计划，就是很好的例证。目前方兴未艾的蛋白质组学研究同样面临方法学问题。 基于这种认识，我们在最近20年来，集中了很大的力量，针对活体动物中的痕量 活性生物分子的实时或动态分析，设计了一些新的研究策略，并发展了相应的研究方法、 实验技术和实验系统。由此启动了若干活体动态生化分析课题或前沿化学生物学研究， 比如学习与记忆过程中的化学组成动态变化分析、极限游泳的恢复周期研究、老年病的 某些化学基础、传染病的化学控制新策略、细胞的化学行为及其与分子的相互作用、肽 ．肽相互作用、手性识别、亲和与免疫作用等，其中部分研究已经取得具有一定突破性 的进展。本报告将主要针对生物分子相互作用以及活动动物体内活性分子测定，介绍方 法学研究方面的进展，主要包括两大内容： l、以微透析、微分离技术和高灵敏度检测为基础的动态分析方法发展 微透析技术发展于20世纪七、八十年代，其主要特点是能够实现对动物的无扰动 或微扰动取样。我们从九十年代开始自主研究，发展出了比较完整的可以直接植入活动 动体内的多维取样系统，由此实现了对动物学习性训练过程中脑内化学物质，特别是氨 基酸和神经递质等重要生物分子变化的实时取样。 微分离技术主要包括毛细管电泳(CE)和微液相色谱(肚-LC)两大类，目前的发展侧重 于芯片技术和集成方法。这些发展可以说是源自于CE的出现。CE的发展和壮大是20 世纪分离科学中的重大事件，使许多以前无法完成的微量复杂样品的分离分析变得比较 容易。我们关于毛细管电泳的研究开始于1980年前后，当时主要针对细胞和核苷酸分 析，后来发展到各种生化分子，建立了多种全新的分离模式和实用方法。 理论上，高灵敏检测的方法很多，但是在使用上，比较可行的方法只有激光诱导荧 泛的应用，利用多次发射技术，其检测灵敏度可以达到单分子水平：CL方法也是高灵 敏的方法，但重现性略差；EC尤其适用于神经递质的检测。我们对这些方法均有研究， 其中LIF已经达到或接近单分子检测水平，可以形成动态分析的整体技术。 2、基于表面等离子体共振(sP袖的新型表面分析与成像方法。 SPR方法是一种无需衍生的检测方法，并且可以模拟生物环境，这对于研究生物活 性分子尤其有利。SPR的另一重大特点是，利用普通CCD和普通光源等，可以实现对 表面上纳米尺度内分子的变化做出响应，是一种灵敏的界面技术。根据SPR的这种特点， 建立成像方法，可以快速简便地实现阵列或高通量分析，这要比目前的DNA和蛋白质 芯片技术优越，而且成本也低，可能成为新一代大规模无损生物分析技术。我们从1997 年开始这方面的研究，发展了在位SPR分析方法，初步建成了成像系统(sPIu)，利用 这些系统，对糖、蛋白相互作用、手性识别等进行了研究，获得了新的结果。 届时将报告并讨论相关的有趣研究进展。 ．42．