原核生物遗传分析.ppt

* * 第六章 病毒与原核生物的遗传学分析 优点： 生活周期短 单倍体，无显隐性关系 研究方法简单 灵敏度高 第一节 噬菌体（病毒）的遗传学分析 一、噬菌体的基本特征 温和噬菌体 烈性噬菌体 二、噬菌体杂交与基因定位 噬菌体的杂交方法：混合感染（复感染、双重感染） 重组合 重组频率= x 100% 重组合+亲组合 例： 1955年 Kaiser 的λ噬菌体实验 + + + x s mi co1 杂交 s：小噬菌斑，mi：微小噬菌斑，co1：中央浑浊小点的噬菌斑。 8.2 6.16 3.76 2091 合计 √ √ 0.86 18 5 13 s + mi + co1 + √ √ 5.3 112 61 51 s co1 + + + mi √ √ 2.9 62 30 32 s + + + co1 mi 90.8 1899 975 724 + + + s co1 mi s-mi co1-mi s-co1 百分比 合计 数目 类型 作图： 3.76 6.16 s co1 mi 8.2 + 2 x 0.86=9.92 第二节 细菌杂交与基因定位 一、E. coli 的性因子 F因子（性因子、致育因子）： 1946年J. Lederberg 在大肠杆菌中有杂交现象，并进一步发现了性因子F。 F因子共有15个基因，3 .5 x 106道尔顿， 6 x 104bp F+：含有F因子的细胞（菌株），具有性伞毛（接合管） F-：不含F因子的细胞（菌株） 2、F’因子与性导 附加体：具能游离于染色体外而独立存在，又可重组于染色体上的遗传因子称为附加体。 F因子是一种附加体。 当F因子从染色体上切离时，可能发生不准确切离而带有宿主的部分基因，这种游离的F因子称为F’因子。 F’因子的转移可以导致F’因子上宿主基因的转移。 3、Hfr菌株 当F因子重组在宿主细胞染色体上时，F因子仍然可以发生转移，此时的转移可推动宿主基因的转移，因此这种菌株称为高频重组菌株（high frequence of recombination, Hfr) F因子推动染色体的转移是以F因子的一端开始，沿F因子所处位置的相反方向进行转移，F因子最后才转移。所以染色体在F因子的推动下发生的转移具有一定的方向和顺序。 二、中断杂交与基因定位 1954年利用Hfr菌株的染色体转移特征（方向性和顺序性），进行了E.coli染色体的基因定位。 Hfr: thr+ leu+ Azs T1s lac+ gal+ strs（供体） F-: thr- leu- Azr T1r lac- gal- strr （受体） 让两种细胞混合，37℃水浴一定时间后取样，组织捣碎机中断杂交，而后涂布在含Str的基本培养基上，考察供体基因在受体细胞出现的时间及顺序（基因转移的时间及顺序）。 概念：选择性标记与反选择性标记 8 8.5 9 11 18 25 thr leu Az T1 lac gal 三、非中断杂交与基因定位（重组作图） 利用F因子可以推动染色体到受体细胞中的特点，将要考察的基因全部转移到受体细胞中，然后考察各种基因型出现的频率，根据重组值计算公式计算重组值，进行作图。 为保证要考察的基因全部转移到受体细胞中，选择性标记必需处于转移的末断。 细菌基因重组的特征：与真核生物相比，原核生物的基因重组有两个特征，一是必需发生偶数次交换，细菌细胞才可存活；二是由于染色体不完整或选择培养的关系，野生的重组子才可存活，所以相反的重组子不出现。 四、E.coli的染色体图 E.coli的基因定位主要以中断杂交的方法进行的，所以E.coli的染色体图是以分钟作单位的。 第三节 细菌转化与基因定位 一、细菌的遗传转化 1928年Griffith发现肺炎双球菌的转化现象。1944年Avery证实转化因子是DNA。 转化（transformation)：外源DNA通过