Myole基因敲低对足细胞对小鼠足细胞足突分子重组的机制的研究.pdfVIP

垫!Q生筮七四届全国』L整置壁瘟太金 太金筮蚕 PCR及Western (3)应用两室弥散系统检测各组跨足细胞单层膜FITC．BSA量的变化；(4)real．timeblotting 免疫印迹检测各组ANGPTL3的表达。 结果(1)嘌呤霉素损伤组P组F—actin紊乱不均匀，部分荧光强度增强，胞膜间连接呈不连续，胞浆内 的分布、FITC-BSA滤过量方面均无明显差异。 表达所致足细胞损伤；(3)ANGFIT3低表达不会引起细胞骨架的损伤。 36．Myole基因敲低对足细胞对小鼠足细胞足突分子 重组的机制研究 王大燕毛建华曹璐刘爱民 浙江大学医学院附属儿童医院肾内科 蛋白尿不仅是各类肾小球疾病常见的临床表现、肾小球滤过屏障受损的主要标志，而且也是导致慢性肾 功能不全、高血压以及心血管病变进展的重要危险因素。近年来的研究表明，肾小球上皮细胞足突(Foot processes，FP)及相邻足突间的裂孔隔膜(Slit 构，上皮细胞特殊结构的维持主要依赖于以肌动蛋白为主的细胞骨架系统(actin细胞骨架)和足突中表达的 特异性蛋白分子(足突分子)。 本研究小组的研究以模式动物斑马鱼为研究对象，采用胚胎早期注射anti—sense I类分子中的Myole，当 察MyosinI类分子基因表达被Knock—down后斑马鱼的表型变化，结果发现，Myosin 其表达下调后，实验动物出现水肿(pericardialedema)、肾小球局部细胞数量减少及pronephriccyst、以及前肾 小管和前肾导管管腔、上皮细胞胞体内吞体(类似于人类。肾小球疾病时的蛋白尿)等改变。同时我们还进行 上皮细胞的重要组分，与上皮细胞的生理功能密切相关。②Myole基因的下调可导致低等脊椎动物斑马鱼 的肾小球滤过膜结构及功能完整性的显著破坏，从而导致斑马鱼出现类似人类肾小球疾病的蛋白尿改变，提 变化可能导致肾小球病变的发生和发展。 材料与方法 2实验方法 2．1小鼠足细胞的培养 Ie基因 2．2敲低足细胞myosin 2．3 Ie基因敲低后mRNA的表达 RT．PCR法检测细胞myosin 一55— 垫!Q生筮土四届全国』L型竖壁痘太金 太盒筮直 2．4 I Western—Blot法检测法检测细胞myosine基因敲低后mRNA的表达 2．5细胞增殖实验(MIT法) 2．6足细胞体外迁移实验 2．7细胞分离实验 2．8细胞黏附能力测定 2．9细胞凋亡实验(磷脂酰丝氨酸外翻分析(AnnexinV法) 2．10体外细胞内吞作用检测 2．11细胞株Myole与足突分子空间构象关系分析 2．12 Myole与F—actin足细胞骨架蛋白及其相关分子的共定位关系分析 3、统计学处理 数据处理采用SPSSl5．0统计软件，数据均已均数±标准差表示，组间以t检验进行处理，结果一P0． 05为差异显著，尸0．01为差异非常显著，P0．05为差异不显著 实验结果 1、不同状态下的细胞形状及足细胞鉴定 1．1330C培养增殖状态下的细胞 1．2 37℃培养分化成熟的足细胞 1．3足细胞鉴定 CD2AP等。本实验以Nephrin及CD2AP作为鉴定足细胞的蛋白分子。 I 2、PT—PCR半定量法mRNA水平检测Myosine干扰效果 片，如下图。