鸡解偶联蛋白(UCP)基因内含子的克隆和系统发生树的构建.pdfVIP

2004学术年会 鸡解偶联蛋白(ucrP)基因内含子的克隆 与系统发生树的构建+ 赵建国，李辉，王启贵，王宇祥，唐志权 东北农业大学动物科技学院，哈尔滨150030 摘要：解偶联蛋白基因是新近发现的能够增加能量的消耗，与脂肪代谢和能量调控密切相关的 一组基因。本研究根据小鼠UCP2基因的剪切方式，设计4对引物成功克隆测序了鸡UCP基因的 全部5个内舍子，发现都是GT．AG类型的内含子，鸡UCP基因的结构和小鼠的UCP2基因结构一 致。以不同物种UCP基因的cds区域序列和内含子2、内含子3序列进行系统发生树的构建，结 果表明：以UCP基因cds区域序列构建的系统发生树与物种树是一致的，UCP基因可以作为研究 动物群体系统演化研究的有效基因；但以内含子2与内含子3序列构建的系统发生树的结构则完全 不是这样，与物种树的差别比较大。 关键词：鸡；解偶联蛋白基因；分子系统发生树 系统发生是指一群有机体发生或进化的历史。在现代系统发生学研究中，研究的重点已经 不再是生物的形态学特征或者其他特性，而是生物大分子尤其是核苷酸序列。分子进化研究 有助于阐明物种进化的分子基础和探索基因的起源，从基因进化的角度研究基因序列与功能 的关系。 解偶联蛋白是位于线粒体内膜的质子转运体，可将呼吸链与ATP产生过程解偶联，使质子化学 梯度消失，造成氧化磷酸化速率增加而ATP产量不变，能量以产热形式散发，增加能量的消耗。 因此人们推测，解偶联蛋白提供了解释肥胖产生原因的新线索’。对于哺乳动物来说，解偶联蛋白主 性的两个基因。鸡的解偶联蛋白基因于2001年由法国Ricquie领导的研究小组首次克隆报道． ucP2和uc丹具有相同的特性，和能量代谢有关。 列上设计4对引物，首次克隆测序了鸡解偶联蛋白基因的全部内含子，并推断出鸡UCP基因的结 构；以cds区域和长度较长的内含子2、3为基础序列分别构建系统发生树并进行比较，探讨UCP 基因在群体系统演化研究中的作用。 1材料与方法 1．1实验动物 实验鸡来自东北农业大学家禽育种基地饲养的快大型肉鸡品系，7周龄时翅静脉采血，EDTA 抗凝。采用常规的酚一氯仿抽提方法从鸡的血细胞中提取DNA。 +资助项目：国家自然科学基金(项目编和黑龙江省杰出青年基金项目 通讯作者：李辉(196卜)-裤导，研究方向：动物遗传学。Tel：045l ca 本文己发表于《遗传》2004．26(1)：50—54 2004学术年会 1．2主要试剂 T DNA聚合酶、啪一18 引物购自大连宝生物公司：Taq Amcrsham 司；测序反应由上海博联生物信息有限公司完成。 1．3引物设计和PCR扩增 结构是一致的，根据小鼠的UCP2基因DNA序列(Accession 列如下： IPFl： ——GGG册TGArrI℃TGTGCT TGT一3 IPRl： 7 —_TCCACCGTGTTGGTGCTG一3 IPF2： ——CATCGGGCTC1ACGA 7 CTC TG一3 口R2： —_1bACCACGTCGGTGG GTr-一3’ 口F3： —_AGGACC』蛆℃GCCAGGGAGGA～3 7 IPR3： —毛℃AGCCACGAAGTGACAGG一3 IPF4： —_()GCAGTACCGCAA：I’G 7 TGC一3 邛．R4： —1-I了GCTGTCTCCCTT