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白木香不同种质类型的RAPD分析 刘军民张桂芳徐鸿华徐吉银 (广州中医药大学中药学院，广州510405) 摘要： 【目的】采用RAPD分子标记技术，对白木香1个野生种及GAP基地3个栽培品种的遗传多样性进 行研究。【方法】筛选随机引物进行RAPD分析，通过UPGMA聚类分析，研究白木香不同种质类型问的遗 传关系，构建白木香不同种质类型的亲缘关系的遗传系统树。【结果】从70个寡核苷酸随机引物中筛选出15 个具有较高多态性的引物进j?PCR扩增，15个引物扩增得至U120条条带，其中多态性条带4l条，占总条带数 的34．17％。聚类分析结果显示，白木香GAP基地的几个种质亲缘关系较近，其中大叶种与中叶种亲缘关系 最近，它们与野生种的亲缘关系较远。【结论】RAPD可以作为白木香不同种质类型的遗传多态性、亲缘关 系和分子鉴别研究的有效手段。 关键词： 白木香种质资源RAPD分析 白木香Aquilaria 香入药，是我国沉香药材唯一资源植物。其野生种质已遭到严重破坏，被列为国家二级重点 保护野生植物Il~21。规范化种植研究基地的白木香不同种质在品质性状上也存有明显的差异。 因而，开展白木香种质资源的遗传多样性研究，对白木香种质资源的保护及开发利用具有十 分重要的意义。 1材料、试剂与仪器 1．1材料大叶种、中叶种及小叶种均于2004年7月8日采自电白县白木香规范化种植 (GAP)研究基地，野生种采自电白县潘坑管理区。经本室徐鸿华教授鉴定为瑞香科植物白 木香Aquilariasinensis(Lour．)Gilg。新鲜叶片采回后置密封塑料袋内用变色硅胶干燥。 1．2试剂生物试剂：随机引物(上海博亚生物技术有限公司)；ExDNA聚合酶，宝 Taq 1)，10×Buffer缓冲液 (TaKaRa)生物工程(大连)有限公司，包括TaKaRaTaq酶(5U／la 250，100bp)，宝(TaKaRa)生物工程(大连)有限公司。其它试剂均为分析纯。 1．3仪器Ultrospec3300 RESEARCH．INC．)，UVPGDS．8000型凝胶自动成像系统。 2方法与结果 2．1方法 加入己灭菌的玻璃砂少量，研磨成细粉；(2)将粉末转入离心管中，加．4℃冷却的不含CTAB 的提取介质(含0．2mol／L的I 基金项目：广东省科学技术厅一广州市科技局联合资助项目(编号2004860302001) @163．com 19 ℃冰柜中保存。 2．2．2 DNA的定量取上述DNA原液适量，用蒸馏水稀释1000倍，采用分光光度法 l。 至10ng／la 2．2．3引物筛选本试验选用上海博亚生物技术有限公司生产的70个寡核苷酸随机引物， 对供试样品的混合模板DNA进行扩增，根据扩增结果，从中筛选出15个具有较高多态性 的引物进行PCR扩增(见表1)。 表l 能产生区分几个样品的条带的引物序列 u 2．2．4RAPI)．PCR扩增反应反应体系总体积为20 l，其组成为：引物0．5ul(20pmol／u1)， ExTaq酶0．2ul(5U／u 1)，加双蒸水至20ul。循环参数为：94℃，3mira M92+0．8～2．0ul(25mM)，DNA5．0ul(10ng／u 琼脂糖电泳，EB染色后置于荧光透射仪上，于UVP凝胶成像仪拍照记录。 2．2结果 2．2．1引物筛选结果从70个寡核苜酸随机引物中筛选出15个具有较高多态性的引物进行 PCR扩增，15个引物扩增得到120条条带，其中多态性条带41条，占总条带数的34．17％。 2．2．2RAPD结果白木香不同种质的DNA存在多态性，它们在植物学特征方面存在的 差异可能是由于DNA多态性导致不同的基因表达或表达量而形成，见图1。 2．2．3数据处理根据照相记录，以清晰可辨且可重复为标准，对每一引物的RAPD扩 增带的位置看作一个位点，