海水养殖鱼类抗菌肽hepcidin基因地研究进展.pdfVIP

翟毽ln’ 第三届毒洋生物膏技术论坛 2005．08．19-23 海水养殖鱼类抗菌肽hepcidin基因的研究进展t 王克坚s’，杨明，任洪林，黄文树，周红玲，邓尚龙， 陈君慧，蔡灵，蔡晶晶，林志勇 (近海海洋环境科学国家重点实验室(厦门大学)，厦门大学，福建，厦门，361005) 摘要：利用分子生物学技术从我国重要海水养殖鱼类鲈鱼、真鲷、黑鲷、罗非鱼、石斑鱼、 accession 公布(GenBank accession 究的进展表明，近年来首先在人分离获得的新抗菌肽hepcidin，也普遍存在于海洋鱼类，可 以推断hepcidin是海洋鱼类重要的先天性免疫活性因子，在海洋鱼类的免疫防御作用中将具 有重要作用。另外，该项研究将hepcidin成熟肽基因在原核和真核细胞系统开展了基因表达 显著的抗革兰氏阳性、阴性细菌的作用，表明可以通过基因工程方法体外高效表达hepcidin， 在鱼类存在的普遍性以及其广谱的抗菌作用，表明该抗茵肽是海洋鱼类免疫防御系统中的重 要免疫因子，预示将具有重要的开发应用价值。 关键词：海水养殖鱼类，抗菌肽，hepcidin，基因，进展 自1981年发现扰菌肽天蚕素以来，动植物抗菌肽的研究一赢受到科学家的关注，迄今 研究表明抗菌肽将是未来医学抗耐药性细菌药物最有希望的有效替代品之--[1】【2】【3】。研究 发现，大多数海洋动物主要共至是唯一依靠先天性(或非特异性)免疫作为防御系统抵抗海 洋环境中箨种有害的微生物，抗菌肽是先天免疫系统中很重要的一类非特异性免疫因子【2】 【3]，相对于陆地动物和高等哺乳动物，海洋动物的抗菌肽更丰富、也更具有特殊性，是海洋 生物资源中还没有得到有效开发的巨大宝库。近年来海洋鱼类及其它动物抗菌肽成为国内外 的研究热点，已发现抗菌肽是海洋鱼类先天性免疫中最重要的广泛存在的成分，分布于鱼类 腮、肝、皮肤、胰脏、胃肠等各个组织，显示出在机体中发挥普遍的防御功能。鉴于海洋动 物的资源巨大且生存于微生物众多的复杂的海洋环境里，因而科学家预言海洋动物抗菌肽将 是替代传统抗生素的新生代抗耐药性细菌药物的重要来源和希望，具有广阔的研发前景。凶 t慕金项目：福建省重大科技项目：厦门市『亩新技术项目(3502220021052) ‘通讯作者：王克坚。E-mailaddress：wkjian@xmu．edu．cn 594 r】 第三届海洋生物高技术论坛 2005．08．19—23 叠毽l 此，对海洋动物抗菌肽的基础与开发利用研究，具有重要的科学意义和实际应用价值。 本论文简要总结了近年来我们实验室开展的有关海水养殖鱼类中一种新抗菌肽 有其独特的重要性质，不仪具有显著的抗微生物功能[4】[5】[6】，还具有铁代谢调节功能[7】， 与人类铁代谢疾病密切相关【8】9】f10】，因此是一种很有开发应用前景的海洋活性物质。 l材料与方法 1．1实验动物： 养殖鱼类鲈鱼、真鲷、黑鲷、罗非鱼、石斑鱼、大黄鱼等分别购买于厦门同安海水养殖鱼排。 1．2实验方法： 1．2．1基凶克隆与扩增：PCR、RT．PCR、RACE、LA—PCR等方法。 PowerLabLtd 1．2．2基I大I载体构建与表达：原核表达系统：基l大|高效快速表达试剂盒，Gene Pichia 公司产品：真核表达载体：Multi．copyExpressionKit，Invitrogen公司产品。 1．2．3抗菌活性试验：微量液体培养法：纸片法；试验用22种菌株包括革兰氏阳性、阴性细 菌，真菌等分别购白中国科学院微生物研究所、Sigma公司(美国ATCC)和集美大学馈赠。 1．3基因数据分析 应用ClustalxI．83进行多序列联配对比；应用DNAStar软件绘制系统进化树。 2实验结果与分析 i di n编码序列及其基因组序列 2．1我国不同品