二维凝胶电泳的新技术及其应用.pdfVIP

·62 · J . of Chinese Microcirculation Feb. 2005 ,Vol. 9 ,No. 1 ( ) 文章编号 : 1007 - 8568 2005 01 - 0062 - 04 ·综述 · 二维凝胶电泳的新技术及其应用 宋 革 , 姜 勇 中图分类号: Q51 文献标识码 : A 1975 年 ,O’ Farrell 以及 Klose 等人发明了双向凝 性蛋白质的情况。并且 ,如果想按照实验目的从 2 - ( ) 胶电泳 two - dimensional el electro horesis , 2 - DE , DE 凝胶的蛋白质印迹中找到感兴趣的目标蛋白 , 需 g p ( 根据样品中蛋白质的两个重要理化特性 :等电点 is- 要跑一个 2 - DE 找出样本中大多数蛋白 , 包括溶解 ) ( ) oelectric points , PI 和分子量 molecular wei ght , MW , 度很低的蛋白。基于此目的 ,出现了宽范围的 IPG胶 将样品中的蛋白质进行分离。其原理是第一向基于 条 , 如 H 3～10 , H 4～7 , H 6～12 , 甚至更宽范围 p p p ( ) 蛋白质 PI 不同用等电聚焦 isoelectric focusin , IEF 分 达到 H 3～12 。与 H 3～12 的胶条相比 , H 6～12 g p p p 离 , 第二向则按 MW 的不同用聚丙烯酰胺十二烷基 的胶条提高了碱性蛋白质的摄取, 原因是 H 3～12 p ( [4 ] 硫酸钠凝胶电泳 sodium dodec l sulfate- ol acr lamide 的胶条降低了反向电内渗 。 y p y y gel electrop horesis , SDS - PAGE) 分离 , 把复杂蛋白混 虽然标准 18 cm 长的双向电泳胶条一般能够分 合物中的蛋白质在二维平面上分开。其后的 25 年 辨显示 2000 个蛋白斑点 , 但还不能分辨给定蛋白质 中 ,2 - DE 经过了多方面的改进 ,而且相应蛋白鉴定 混合物样本中的所有蛋白质 ,