STIM1蛋白SOAR结构域与小分子的共结晶及X射线衍射的初步研究.pdfVIP

第 48卷 第 1期 南 开 大 学 学 报 (自然科学版) 2015年 2月 ActaScientiarum Natrali U i rsit口tiNn是盘iensis Vo1．48 N_O1 Feb．2O15 文章编号 ：0465—7942(2015)01—0001—06 STIM1蛋 白SOAR结构域与小分子的共结晶及 X射线衍射的初步研究 王向宇 (南开大学 生命科学学院，天津 300071) 摘要 ：钙库操纵的钙 内流 (Store—operatedCa entry)是钙离子进入细胞的一种经典方式，对于多种细胞生 理活动具有重要 的意义．它是 由位于内质网膜上的钙离子感受器 STIM1分子与细胞膜上 的通道蛋 白ORAI1相 互作用而被激活的．其 中，STIM1位于细胞质 内的c端含有一段 s0AR(STIM—ORAIassociationregion)结构 域 ，可以和ORAI1直接作用从而激活ORAI1组成 的CRAC通道．考虑到 STIM1在钙库操纵的钙内流过程中的 重要调节作用 ，通过药物分子来调节 STIM1的活性从而影响细胞、甚至机体 的生理活动势必成为关注的方 向． 本实验将人类 STIM1分子 的SOAR结构域在大肠杆菌 中异源表达 ，经过多种层析方法获得 了纯度较高的 SOAR蛋 白，并通过与一种小分子—— 间苯二酚的共结晶，获得了复合物的晶体．X光衍射数据收集到0．21nm， 并用 HKL2000软件进行处理．这些数据为 SOAR与 间苯二酚复合物结构的解析奠定 了基础． 关键词 ：SOAR；复合物 ；共结晶；X射线衍射 中图分类号 ：Q51 文献标识码 ：A 0 引 言 钙离子 的信号转导在细胞分泌、转录、生长、分裂及凋亡等生理活动中起着重要 的调节作用口]．钙信号 的转导包括钙离子通过细胞质膜进入细胞 、细胞内钙库的钙释放等过程组成 ，涉及细胞质膜和细胞器膜上 的多个钙离子通道的协同作用．其中，钙释放激活的钙离子通道 (cRAc通道)是钙离子进入细胞 、维持细 胞内钙离子浓度的重要途径l2]．CRAC通道的主要组成部分是 oRAI1分子 ，它是位于细胞质膜上的 4次 跨膜蛋 白，蛋 白的N端和 c端都位于细胞质膜 内 ]．研究发现，CRAC通道的开放是由细胞 内主要的钙库 一 内质 网内的钙离子浓度降低引起 ，这一过程被描述为钙库操纵的钙 内流 (SOCE) ；而能够感受 内质网 腔内钙离子、调节SOCE的启动的是位于内质网膜上 的STIM1分子_5]． STIM1分子是一个单次跨膜蛋 白，其 c端位于细胞质内，包含两个 coiled—coil结构域、一个脯氨酸／ 丝氨酸 富含结构域和一个赖氨酸富含结构域 6【；N端位于 内质 网内，包含有两个 EF一手型结构域和一个 SAM 结构域_7]．STIM1分子 的激活直接控制 CRAC通道的开放 ，是 SOCE的重要调节分子．在静息状态 下，STIM1分子 以二体 的形式广泛地分布在 内质 网膜上_5 ；当 内质 网内钙离子浓度 降低后 ，结合在 STIM1分子 N端 EF一手型结构域上 的钙离子被释放，导致 STIM1的N端构象改变 ，STIM1分子发生寡 聚化 ，并移动到 内质网与细胞膜 的接合处 ，与 ORAI1相互作用从而激活 CRAC通道，最终导致钙离子进 入细胞内[9--10]其中，STIM1的C端胞质区包含一段螺旋状结构域 ，可以与ORAI1分子直接作用，被称为 STIM—ORAI激活结构域 (S0AR)…]，对CRAC通道的开放起着关键作用． 本实验室在对 STIM1分子及 SOAR结构域的结构和功能研究过程中，发现了一种可以和 SOAR发 生特异性作用的分子一间苯二酚．由于 SOCE参与多种细胞功能过程 ，是潜在的药物靶点，而 STIM1分 子也被发现在一些生理现象中起着重要作用 (如心肌肥大[123等)，将 SOAR与间苯二酚共结晶，并对 X射 线衍射数据进行处理 ，以期通过对 SOAR一间苯二酚复合物结构的解