猪胚胎冷冻保存试验的研究初报.pdfVIP

第十二届全国动物繁殖学术讨论-g．论文集 猪胚胎冷冻保存试验研究初报 刘丑生1王志刚“邓凯伟21孔学民赵俊金1朱芳贤，曾维斌3 全国畜牧兽医总站畜禽牧草种质资源保存利用中心l 南京农业大学动物科技学院2 甘肃农业大学动物科技学院3 摘要本研究采用通过胚胎在冷冻前在细胞松弛素B处理研究表明，改进了玻璃化冷冻保存的胚胎 的培养效果，探讨1损伤的胚胎细胞的细胞超微结构(线粒体、细胞骨架)的损伤机制。深入研究1玻 璃化冷冻的胚胎损伤与线粒体的关系。 1前言 在胚胎冷冻的过程中，会造成胚胎的细胞的 猪早期发育阶段的胚胎其细胞质中含有大 超微结构造成一定的损伤。1997年G．VAJTA 量的脂肪滴颗粒，对低温极为敏感的特点，因此 等对牛胚胎冷冻后进行细胞超微结构的检测时 早期胚胎在15℃下时，容易受到低温损伤(Pol。发现胚胎的线粒体、细胞桥粒、细胞膜等结构在 lardand 冷冻中会受到一定的损伤。对胚胎在冷冻过程 others．1993)。猪胚胎在冷冻保存中受 到冷损伤可能与胚胎中的脂肪滴颗粒在冷冻的 中的超微结构的损伤对于进一步研究胚胎在冷 过程中，其结构被破坏或发生变化，形成了大的 冻过程中的冷冻损伤的分子生物学机制具有重 脂肪滴颗粒，使胚胎受到一定的损伤。胚胎随着 要的意义。而在猪胚胎的冷冻过程中还没有进 发育的进行，胚胎细胞质中的脂肪滴颗粒逐渐减 行细胞超微结构损伤的研究。 少，发育到孵化囊胚时脂肪滴的含量下降到最 本试验的目的是通过对猪胚胎的常规冷冻 et．，al 和玻璃化冷冻，从而筛选出适合猪胚胎冷冻的冷 低，胚胎在这一阶段适合冷冻(Nagashima 1992)。 冻保护剂和适合的胚胎冷冻程序。并且对胚胎 用传统的低温冷冻方法保存猪胚胎已经取 在冷冻后的胚胎活力和胚胎的线粒体损伤进行 得了一定的成果，但冷冻需要花费较长的时间和 研究。 昂贵的费用，以及在冷冻过程中的细胞外液植冰 2材料和方法 的复杂程亭。用玻璃化冷冻猪晚期阶段的胚胎 2．I试验动物试验猪为中国农业科学院畜牧 也取得了一定的成功。把胚胎放入到一小滴冷 研究所种猪场青年母猪、成年母猪，1—5胎。 冻液滴中，胚胎吸入细管中马上投入液氮中，这 2．2实验用品与药品：体视镜、荧光显微镜 样可以快速的进行降温处理。 (oI脚US、日本)离心机(Sigrm)日本株式会 ※王志刚为项目主持人。 率项目是国家十五科技攻关计划畜禽规模化养殖项目“猪的精液、胚胎冷冻技术研究”的部分内容。 一377— 第十二届全国动物繁殖学术讨论会论文集 社程序化冷冻仪ET一1N、水浴锅，冷冻细管(法+0．5％的BSA 国卡苏公司)、PMSG(内蒙古赤峰激素厂)、HCG 胚胎按常规法冷冻。 (宁波激素厂)、PBS、甘油(Sigma)、乙二醇(北京3．2猪胚胎的玻璃化冷冻 化工厂)、FCS(胎牛血清，HYBio．)、BSA(牛 A组：孵化囊胚VSl：6．5M甘油+6％BSA 血清白蛋白华美公司)、CB(细胞松弛素Sig．(M2为基础液)的冷冻液 rm)、pvP(聚已烯吡咯烷酮)、蔗糖、TCM一199、 }Ⅱ冲ES(华美公司)、二乙酰荧光素(Sigma)、若mlCB在37℃孵育中培养40分钟。 丹明123(Sigma) 胚胎在25％VSl冷冻液中平衡20分钟后 2．3超排处理及胚胎的采集