猪圆环病毒2型Cap蛋白核定位信号区抗原表位鉴定.pdfVIP

病毒病一猪2型圆环病毒感染 用ELISA方法检测PCV2感染或疫苗免疫猪I札清中和抗体的报道，本研究处于领先水甲，可以快速、 高效地枪测血清中和抗体，为PcV2感染的血清流行病学调查，致病机制及疫苗的免疫评价提供一 种有效技术手段。 参考文献(略) 猪圆环病毒2型Cap蛋白核定位信号区抗原表位的鉴定 郭龙军 陆月华黄立平危艳武刘长明’ (中国农业科学院哈尔滨兽医研究所猪传染病研究室兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001) cap蛋白为病毒的主要结构蛋白，起保护性抗原作用，对其进行抗原表位鉴定十分必要。本研究采用杆状病毒表达 的重组cap蛋白作为免疫原制备5株单克隆抗体，通过原核表达系统对oRF2基因进行了截短表达，先行对Cap 蛋白抗原表位进行宽幅定位，然后利用合成多肽对Cap抗原表位做精确扫描定位。5株单抗中有4株针对同一抗原 仅与重组c印蛋白产生免疫活性反应，对4个分段截短表达的cap蛋白无免疫活性反应，鉴于该单抗具有中和病毒 活性，针对的可能是构象表位。本研究首次鉴定出位于cap蛋白核定位信号区的一个抗原表位，为以后Cap蛋白 功能及核定位机理的研究奠定基础。 关键词猪圆环病毒2型；Cap蛋白；抗原表位；多肽扫描；核定位信号 circovims 猪圆环病毒2型(Porcine type multisysteIIlicwasting 北荚、欧洲及亚洲多数国家均有本病流行的报道【l’5J。PCV2属于圆环病毒科圆环病毒属成员，圆形 小颗粒状，育径17nm，争一十面体对称，是目前已知最小的动物病毒之一。该病毒无囊膜，基因 保护性抗原丰要成分【l叫l】；ORF3编码一种与细胞凋亡相关的蛋白，其免疫功能尚不明了【12’bl。鉴 用肽扫描(PEPSCAN)技术对PCV2 C叩蛋白抗原表位进行了筛选与鉴定，证明69．83氨基酸(aa)， 等(2008)利用单抗与不同毒株PCV2Cap蛋白免疫反应性差异，证明不同PCv2流行毒株存在抗原 Cap蛋白抗原表位之间存在差异，利用单抗将PCv2 差异12…。Shang等(2009)证实不同基因犁PCV2 毒株分为3个不同的抗原表型【2¨。Cap蛋白抗原表位的报道较多，但有关Cap蛋白核定位信号区及具 有病毒中和活性精确衷位的研究尚属窄白。利用本实验室先前制各的抗重组C印蛋白的5株单抗【221， 通过对Cap蛋白编码基【大loRF2的原核截短表达，进而采用合成的多肽进行的肽扫描方法，对PCv2 Cap蛋白抗原表侮鉴定和分析，旨在获得具有诱导机体产生免疫保护抗原靶位，筛选具有利于病毒 功能机制研究和鉴别诊断价值的抗原表位，为新型疫苗的研制、病毒功能研究及鉴别诊断方法的建 立开辟新途径。 1材料与方法 1．1 PCV2 Cap蛋白单克隆抗体的制备及标准毒株 5株针对PCV2 2|。PCV2 3|，PCV2 及保存12 JF毒株由本实验室分离鉴定并保存i2 ORF2基凶模板和C印蛋白截短表达 以及合成短肽的设计均按该毒株基因序列进行。 作者简介： 郭龙军(1983．)，男，山东高密人，博士研究生，主要从事猪病毒病研究． +通讯作者：Email：lcm@hvri．ac．cn 226 第口发猪病学术研讨会会议论文集 I．2质粒聂试剂 Pcv2 InvI们群n公司：辣根过氧化物酶(HRP)．山羊抗鼠IgO购自Invlcmg铀公刊；顶染蛋白Ma排er购自 FerInehp鸪公司：限制性内切酶、Ex DNALlgase均购自nangen公司，质粒提取试剂盒购自爱思进公司，其它试剂均为国产分析纯。 ljca口蛋白基因的瓿短扩增引物 60设计4对在5’ 根据本实验窜克隆的PcV2JF毒株的c8p蛋白摹田序列(0RF2)，利用01190 段分别命名为c3pA、c印B、c印c和capD，片段之间均相互重叠，覆盖了粘个cap蚩白基因 (0RF2)，如图l所示。 寰1 Pcv20RF2基因赶短片段的PcR扩增