一株马立克氏病毒miRNA缺失株的构建和鉴定.pdfVIP

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集 一株马立克氏病毒miRNA缺失株的构建及鉴定 杨文闯，刘长军。，张艳萍，张锋，侯广玉，丛锋，许娜娜 (中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／禽传染病研究室，黑龙江哈尔滨150001) 摘 要：马立克氏病(MD)是由马立克氏病毒(删)引起的T淋巴细胞增生性疾病。为研究MDV编码的 进行PCR鉴定，证明该重组病毒的遗传性状稳定，而且缺失了这部分MDV基因组编码的miRNA序列不影响病 的平台。 关键词：马立克氏病毒；miRNA；致瘤性 马立克氏病毒(MDV)是致瘤性最强的疱疹病毒 之一，它可以引发以恶性T淋巴细胞增生为特征的 致瘤性的关系，以带有B．半乳糖苷酶(LacZ)报告 马立克氏病(MD)。MD传播速度快、传播范围广、基因的重组MDV流行毒株rMS△Meq为亲本病毒， 潜伏期长，在世界养禽业的国家均有流行，每年都 通过反向同源重组方法，对MDV．1的Met]基因上 给养禽业造成巨大经济损失。在已经被预测到的 游部分第一簇miRNA进行缺失，构建重组病毒rMS MDV的140多个阅读框架中，Meq基因一直被认为 in- 是主要致瘤基因。另外，病毒类白介素8(viral研究MDV致瘤机制和基因功能提供一个新的平台。 ku磷蛋白 terleukin-8)、阅读框架4(RLOP,Y4)和38 复合体(pp38)都与MDV的致瘤性有一定关系。最近 1材料和方法 研究发现血清学l型MDV(MDV．1)编码的miRNA 与病毒的致瘤性存在重要的关系。miRNA是一类具 有19个25个核苷酸长度的内源性非编码区 兽医研究所马立克研究组2007年2月从四川省眉山 RNA，广泛存在于真核生物和病毒之中。MD是Ot 地区分离的流行毒株。亲本病毒rMSaMeq株为本 疱疹病毒亚科成员，目前研究者已经在MDV．1中实验在MS株基础上缺失了Meq基因并插入B．半 kb 发现了14种miRNA[1。31，它们被分为3簇集中于9 乳糖苷酶(LacZ)报告基因后构建的重组MDV。无特 长度的MDV基因组的RL／RS范围内，通过North- 定病原体(SPF)鸡胚由中国农业科学院哈尔滨兽医研 elTl blotting和实时荧光定量PCR的方法检测MDV．1究所实验动物中心提供。 编码的miRNAtl，41，发现位于Meq基因上游的第一 簇miRNA在MDV．1诱导的肿瘤组织和细胞中显现 感受态细胞购买自哈尔滨赛拓生物公司。商品化的 出很高的表达量，因此人们推测第一簇miRNA与 pUCl9载体购自宝生物工程(大连)有限公司。 MDV致瘤性有重要关系。 1．3主要试剂Ex I、 Taq酶，限制性内切酶Sac (ZGKJ200906) 作者简介：杨文闯(1985．)，女，河北沧县人，硕士研究生，主要从事动物病毒免疫学及分子生物学研究． ‘通信作者：E-mail：liuej93711@sohu．coin ——45—— 中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集 XbaI和HindIII，T4DNA连接酶，蛋白酶K，分子总D