AFLP技术在中国的枣优良品种鉴定中的应用.pdfVIP

于果研究进展 AFLP技术在中国枣优良品种鉴定中的应用 宋婉1续丸如 扬凯2贾继增2 (1北京林业太掌森林资源与环境学院； 中国农业科学院品资所，北京，100083) 提要本文对从中国枣现有生产品种中选取的67个优良品种(品系)以及野生酸 枣共68个供试材料进行了AFLP分析。用9对EcoRj和MseJ引物共得到492奈 谱带，其中多态性带为330奈，多态性百分率为68．5％。9对引物中有4对可以将 供试品种100％地鍪别开，其中16个品种具有品种特异(具有或缺失)的AFLP指 纹。枣品种(品系)问的遗传相似性较高，平均为0．83。用单匹配相似性系数、UPG— MA方法建立的枣品种亲缘关系树状图在相似性系数值0．8l处可以将供试材料分 为10蛆。文中还对中国枣品种的起源与演化以及枣与酸枣的关系问题进行了探讨。 关键词枣；AFLP；品种鉴定；DNA指纹图谱 中国枣(ZizyphusjujubaMill-)在长达数千年的栽培历史过程中，由于分离、突变、迁 移、自然选择、人工选择的综合作用，其群体已经产生了大量的遗传变异。正式发表的品种 已有700个之多。这些品种大多数是根据果实特征命名的。这种分类和命名方法因缺乏科学 的鉴定，容易造成混乱。在茸木、接穗、信息快速交流的今天，这种混乱已经并正在给我国 的枣树生产带来重大损失。国内不少科技工作者已从花粉学、核型、同工酶等方面做了很多 努力以改变枣树品种混乱的局面。由于受方法和条件的限制，对现状没有大的改观。 AFLP(AmplifiedFragmentLengthPolymorphism)标记技术是1993年由荷兰的Zabeau 和Vos博士提出并完善的。该技术的原理非常简单．它是基于RFLP技术和PCR技术的结 合：DNA经内切酶酶切后，片段的末端各连接上一个双链的接头，随后经分别与两端接头和 邻接酶切位点相匹配的一对引物进行扩增，最后用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离扩增产物。它 具有稳定性强、DNA用量小、多样性高的优点。现已广泛应于生物多样性、指纹图谱的构建， 基因克隆等诸多研究领域，显示了广阔的应用前景。 利用分子生物学方法研究枣树品种的指纹图谱还鲜见报道。本文应用AFLP技术中国枣 优良品种进行鉴定，并对枣种内各个品种间、枣与酸枣之间的亲缘关系进行厂研究。 l材料和方法 1．1供试材料 从中国现有枣700多个品种中，主要筛选各省主栽品种，并根据优质、抗性强、具有观 赏性等特殊品质，选出62个中国枣优良品种，加上河北沧县枣良繁场选育出的金丝小枣5个 优良无性系(品系)以及野生酸枣的1份材料，总共68份材料。枣品种材料中包括鲜食品种 22个，制干品种17个，兼用品种12个，蜜枣品种5个及观赏品种5个。供试材料名称及编 生理生化与形态解剖 号如表1所示。供试品种叶片材料取自山西果树所枣国家种质资源圃和河北沧县枣良繁场。 1．2 DNA提取及纯化方法 由于AFLP方法首先第一步要用双酶切，对DNA模板质量的要求比较高·所以采用苯 酚一氯仿抽提法。 1。3荧光法AFLP的实验方法 1．3．1 样品酶切和连接的混合液包括：DNAf．200ng／p1)1．25／．1，Msel5单位，EcoRl5单位，10× RLBuffer(50mMTrisHAc(DH7．5)，50mMKAc，25mM MgAc，250mM DTT，250ng／ BSA plBSA)8．o”l，2．599／}d (50p mole／91)1．opI，10mM 积40f*l。酶切和连接在37c过夜。EcoRf和Msel的接头序列见表2； 袭1用于AFFLP分析的枣供试材料 种类 品种 产地 编号 种粪 品种 产地 编号 种类